| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 文献综述 | 第16-26页 |
| 1.1 牛传染性鼻气管炎概况 | 第16-17页 |
| 1.2 牛传染性鼻气管炎病毒概述 | 第17-21页 |
| 1.2.1 病毒粒子结构 | 第17页 |
| 1.2.2 病毒分型 | 第17页 |
| 1.2.3 病毒理化性质及宿主范围 | 第17-18页 |
| 1.2.4 BHV-1 感染机制研究进展 | 第18-21页 |
| 1.3 BHV-1gB、gC和 gD蛋白结构及其功能 | 第21-22页 |
| 1.3.1 gB | 第21页 |
| 1.3.2 gC | 第21页 |
| 1.3.3 gD | 第21-22页 |
| 1.4 IBRV疫苗研究 | 第22-25页 |
| 1.4.1 弱毒活疫苗 | 第22-23页 |
| 1.4.2 灭活苗 | 第23页 |
| 1.4.3 亚单位疫苗 | 第23页 |
| 1.4.4 DNA疫苗 | 第23-24页 |
| 1.4.5 活载体疫苗 | 第24-25页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 2 P2-gB/gC/gD多表位重组嵌合蛋白的表达及免疫原性分析 | 第26-44页 |
| 2.1 材料 | 第26页 |
| 2.1.1 细胞株、毒株、质粒、菌株及实验动物 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-36页 |
| 2.2.1 牛传染性鼻气管炎病毒多表位基因串联设计 | 第26-27页 |
| 2.2.2 pET-28a-P2-gB/gC/gD重组质粒的构建 | 第27-30页 |
| 2.2.3 P2-gB/gC/gD重组蛋白的表达及纯化 | 第30-34页 |
| 2.2.4 P2-gB/gC/gD重组蛋白免疫效果测定 | 第34-36页 |
| 2.3 结果 | 第36-41页 |
| 2.3.1 牛传染性鼻气管炎病毒多抗原表位基因串联设计 | 第36-37页 |
| 2.3.2 pET-28a-P2-gB/gC/gD重组质粒的鉴定 | 第37页 |
| 2.3.3 P2-gB/gC/gD重组蛋白SDS-PAGE和 Western blot鉴定 | 第37-39页 |
| 2.3.4 纯化产物的鉴定 | 第39-40页 |
| 2.3.5 血清中抗体水平检测 | 第40-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-44页 |
| 3 分子佐剂IL-6与P2-gB/gC/gD的共表达及纯化 | 第44-58页 |
| 3.1 材料 | 第44页 |
| 3.1.1 质粒、菌株 | 第44页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第44页 |
| 3.2 方法 | 第44-50页 |
| 3.2.1 pET-28a-P2-gB/gC/gD-BoIL-6、pET-28a-P2-gD-BoIL-6及pET-28a-BoIL-6 重组质粒的构建 | 第44-48页 |
| 3.2.2 pET-28a-P2-gB/gC/gD-RaIL-6 重组质粒的构建 | 第48-50页 |
| 3.2.3 重组蛋白的表达及纯化 | 第50页 |
| 3.3 结果 | 第50-56页 |
| 3.3.1 兔IL-6 片段的扩增 | 第50-51页 |
| 3.3.2 重组质粒的双酶切鉴定 | 第51-53页 |
| 3.3.3 重组蛋白SDS-PAGE鉴定 | 第53-54页 |
| 3.3.4 纯化产物鉴定 | 第54-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-58页 |
| 4 免疫保护性分析 | 第58-78页 |
| 4.1 材料 | 第58页 |
| 4.1.1 毒株、细胞及实验动物 | 第58页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第58页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第58页 |
| 4.2 方法 | 第58-61页 |
| 4.2.1 重组蛋白免疫效果测定 | 第58-59页 |
| 4.2.2 实时荧光定量PCR方法的建立 | 第59-60页 |
| 4.2.3 动物攻毒保护性实验 | 第60页 |
| 4.2.4 数据的统计学分析 | 第60-61页 |
| 4.3 结果 | 第61-75页 |
| 4.3.1 抗体水平的检测 | 第61页 |
| 4.3.2 中和抗体测定结果 | 第61-62页 |
| 4.3.3 IL-4及IFN-γ的测定 | 第62-63页 |
| 4.3.4 标准曲线的绘制 | 第63-65页 |
| 4.3.5 攻毒后体温及病毒拷贝数的测定 | 第65-67页 |
| 4.3.6 攻毒后肺脏病理组织学变化 | 第67-70页 |
| 4.3.7 再激活后体温及病毒拷贝数的测定 | 第70-72页 |
| 4.3.8 再激活后病理组织学变化 | 第72-75页 |
| 4.4 讨论 | 第75-78页 |
| 5 全文结论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 个人简历 | 第92页 |
