| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第一章 引言 | 第12-18页 |
| 1 CRISPR/Cas9基因编辑技术 | 第12-14页 |
| 1.1 CRISPR/Cas9的作用机制 | 第12-13页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9的分类 | 第13-14页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9系统的应用 | 第14页 |
| 2 kctd基因家族简介 | 第14-16页 |
| 3 斑马鱼简介 | 第16页 |
| 4 七鳃鳗简介 | 第16页 |
| 5 生物信息学技术与应用 | 第16-18页 |
| 第二章 七鳃鳗kctd基因家族成员全基因组鉴定及进化分析 | 第18-32页 |
| 1 材料与方法 | 第18-19页 |
| 1.1 七鳃鳗kctd基因家族成员的鉴定 | 第18页 |
| 1.2 kctd家族蛋白序列保守基序分析 | 第18页 |
| 1.3 海七鳃鳗kctd基因表达模式分析 | 第18-19页 |
| 1.4 其它物种kctd基因家族成员鉴定 | 第19页 |
| 1.5 kctd基因家族系统进化树构建 | 第19页 |
| 2.结果分析 | 第19-30页 |
| 2.1 七鳃鳗kctd基因家族成员鉴定 | 第19-21页 |
| 2.2 七鳃鳗kctd基因结构分析 | 第21-23页 |
| 2.3 kctd家族蛋白保守基序分析 | 第23-25页 |
| 2.4 kctd基因组织表达模式分析 | 第25-26页 |
| 2.5 其它物种kctd基因家族成员鉴定 | 第26-27页 |
| 2.6 kctd基因家族的进化分析 | 第27-30页 |
| 3 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 CRISPR/Cas9系统介导的斑马鱼kctd突变体的制备 | 第32-64页 |
| 1 实验材料 | 第32-33页 |
| 1.1 斑马鱼来源与养殖环境 | 第32页 |
| 1.2 实验仪器 | 第32页 |
| 1.3 实验试剂 | 第32-33页 |
| 2 实验方法 | 第33-41页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第33页 |
| 2.2 gRNA的设计与引物信息 | 第33-35页 |
| 2.3 gRNA的合成 | 第35-38页 |
| 2.4 Cas9mRNA的合成 | 第38-39页 |
| 2.5 显微注射 | 第39-40页 |
| 2.6 突变体筛选以及效率检测 | 第40-41页 |
| 3 实验结果 | 第41-62页 |
| 3.1 kctd3突变体制备 | 第41-48页 |
| 3.2 kctd7突变体制备 | 第48-54页 |
| 3.3 kctd8突变体制备 | 第54-58页 |
| 3.4 kctd14突变体制备 | 第58-62页 |
| 4.讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 半定量PR-PCR检测kctd基因的差异表达 | 第64-80页 |
| 1 实验材料 | 第64-65页 |
| 1.1 斑马鱼来源与养殖环境 | 第64页 |
| 1.2 实验仪器 | 第64页 |
| 1.3 实验试剂 | 第64-65页 |
| 2 实验方法 | 第65-67页 |
| 2.1 RNA的提取 | 第65页 |
| 2.2 反转录获得cDNA | 第65-66页 |
| 2.3 RT-PCR引物设计 | 第66页 |
| 2.4 优化PCR反应体系 | 第66-67页 |
| 3.结果分析 | 第67-78页 |
| 3.1 循环数 | 第67-70页 |
| 3.2 kctd基因组织特异性表达 | 第70-74页 |
| 3.3 kctd基因时间特异性表达 | 第74-78页 |
| 4.讨论 | 第78-80页 |
| 第五章 总结 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 附录 | 第87-108页 |
| 致谢 | 第108页 |
