| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 白头翁皂苷 | 第10-14页 |
| 1.1.1 白头翁及白头翁皂苷 | 第10页 |
| 1.1.2 白头翁皂苷的分类及结构 | 第10-12页 |
| 1.1.3 白头翁皂苷的药理作用 | 第12-14页 |
| 1.1.3.1 增强免疫力作用 | 第12-13页 |
| 1.1.3.2 杀精、抗滴虫作用 | 第13页 |
| 1.1.3.3 抗炎、抗氧化作用 | 第13页 |
| 1.1.3.4 抗癌作用 | 第13-14页 |
| 1.2 蛋白质的分离纯化 | 第14页 |
| 1.3 蛋白质电印迹及N-端序列的测定 | 第14-16页 |
| 1.3.1 蛋白质的电印迹 | 第14-15页 |
| 1.3.2 蛋白质N-端序列的测定 | 第15页 |
| 1.3.3 蛋白质肽质谱的测定 | 第15-16页 |
| 1.4 真核生物基因克隆的策略 | 第16-18页 |
| 1.4.1 RNA的提取 | 第16页 |
| 1.4.2 PCR技术 | 第16-18页 |
| 1.4.2.1 RT-PCR技术 | 第17页 |
| 1.4.2.2 RACE技术 | 第17-18页 |
| 1.5 序列的测定与分析 | 第18-19页 |
| 1.5.1 序列的测定 | 第18页 |
| 1.5.2 序列的分析 | 第18-19页 |
| 1.6 白头翁皂苷糖基水解酶的研究现状 | 第19-20页 |
| 1.7 本论文的研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-38页 |
| 2.1 实验材料与设备 | 第22-24页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基 | 第22页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-38页 |
| 2.2.1 液体发酵培养基的制备 | 第24页 |
| 2.2.1.1 麦芽汁培养基的制备 | 第24页 |
| 2.2.1.2 诱导物浸出液的制备 | 第24页 |
| 2.2.2 菌种液体发酵条件的确定 | 第24-25页 |
| 2.2.2.1 培养基中诱导物浓度的确定 | 第24-25页 |
| 2.2.2.2 培养时间的确定 | 第25页 |
| 2.2.3 粗酶液的制备与活力测定 | 第25-26页 |
| 2.2.3.1 粗酶液的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.3.2 薄层层析法(TLC)对酶活性的检测 | 第26页 |
| 2.2.3.3 酶液活力测定 | 第26页 |
| 2.2.4 酶的分离纯化及浓度测定 | 第26-27页 |
| 2.2.4.1 酶的分离纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.4.2 酶蛋白分子量的测定 | 第27页 |
| 2.2.5 蛋白质电印迹及N-端序列的测定 | 第27-29页 |
| 2.2.5.1 蛋白质电印迹(及蛋白质转膜) | 第27-29页 |
| 2.2.5.2 蛋白质N-端序列的测定 | 第29页 |
| 2.2.5.3 蛋白质肽质谱的测定 | 第29页 |
| 2.2.6 RNA的提取及质量检测 | 第29-32页 |
| 2.2.6.1 菌体的收集 | 第29-30页 |
| 2.2.6.2 RNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.6.3 RNA的质量检测 | 第30-32页 |
| 2.2.7 总RNA的纯化 | 第32页 |
| 2.2.8 白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶基因全序列的调取 | 第32-38页 |
| 2.2.8.1 利用3’RACE技术对基因序列扩增及测定 | 第32-35页 |
| 2.2.8.2 利用5’RACE技术对基因序列扩增及测定 | 第35-37页 |
| 2.2.8.3 全长CDS序列的获得 | 第37页 |
| 2.2.8.4 白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶基因全序列的相似性分析 | 第37-38页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第38-53页 |
| 3.1 菌种液体发酵条件的确定 | 第38-39页 |
| 3.1.1 培养基中诱导物浓度的确定 | 第38页 |
| 3.1.2 培养时间的确定 | 第38-39页 |
| 3.2 白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶的分离纯化 | 第39-44页 |
| 3.2.1 DEAE-Cellulose DE52对白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶的分离纯化 | 第39-42页 |
| 3.2.2 酶蛋白分子量测定 | 第42-44页 |
| 3.3 蛋白质电印迹及蛋白质N-端序列的测定 | 第44-46页 |
| 3.3.1 蛋白质电印迹 | 第44页 |
| 3.3.2 蛋白质N-端序列的测定 | 第44-45页 |
| 3.3.3 蛋白质肽质谱的测定 | 第45-46页 |
| 3.4 RNA的提取及质量检测 | 第46-48页 |
| 3.4.1 RNA的提取 | 第46-47页 |
| 3.4.2 RNA的质量检测 | 第47-48页 |
| 3.5 白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶基因全序列的调取 | 第48-53页 |
| 3.5.1 利用3’RACE技术对基因序列的扩增及测定 | 第48-50页 |
| 3.5.1.1 基因序列的扩增 | 第48-49页 |
| 3.5.1.2 基因序列的测定 | 第49-50页 |
| 3.5.2 利用5’RACE技术对基因序列的扩增及测定 | 第50-51页 |
| 3.5.2.1 基因序列的扩增 | 第50页 |
| 3.5.2.2 基因序列的测定 | 第50-51页 |
| 3.5.3 全长CDS序列的获得 | 第51-52页 |
| 3.5.4 白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶基因全序列的相似性分析 | 第52-53页 |
| 第四章 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 附录 A 5’端基因测序彩图 | 第58-59页 |
| 附录 B 3’端基因序列彩图 | 第59-60页 |
| 附录 C 测序方向图 | 第60-61页 |
| 附录 D 肽质谱图 | 第61-62页 |
| 附录 E 基因全序列 | 第62页 |
