| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-21页 |
| 一、恶性肿瘤治疗的研究进展 | 第9-15页 |
| (一)手术治疗 | 第9-10页 |
| (二)放射治疗 | 第10页 |
| (三)化学治疗 | 第10-11页 |
| (四)免疫治疗 | 第11-15页 |
| 二、肿瘤抗原 | 第15-20页 |
| (一)肿瘤特异性抗原 | 第15-16页 |
| (二)肿瘤相关抗原 | 第16-20页 |
| 三、本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第21-42页 |
| 一、实验材料 | 第21-25页 |
| (一)实验仪器设备 | 第21页 |
| (二)菌株及试剂 | 第21-25页 |
| 二、实验方法 | 第25-42页 |
| (一)载体构建 | 第25-32页 |
| (二)目的蛋白的原核表达 | 第32-40页 |
| (三)纯化蛋白对体外淋巴细胞转化的影响 | 第40-42页 |
| 第三部分 实验结果 | 第42-71页 |
| 一、triTH、TSP50_(114-349)、triTH-TSP50_(114-349)融合蛋白的表达 | 第42-43页 |
| 二、pET28a-triTH-TSP50_(114-349)原核表达载体的重新构建 | 第43-44页 |
| 三、pET28a-Cripto-1_(29-168)原核表达载体的构建 | 第44-46页 |
| (一)Cripto-1_(29-168)序列的PCR扩增 | 第44-45页 |
| (二)pMD?18-T-Cripto-1_(29-168)的构建 | 第45页 |
| (三)pET28a-Cripto-1_(29-168)表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 四、pET28a-triTH-Cripto-1_(29-168)表达载体的构建 | 第46-48页 |
| 五、融合蛋白的原核表达 | 第48-58页 |
| (一)triTH-TSP50_(114-349)、Cripto-1_(29-168)、triTH-Cripto-1_(29-168)的原核表达 | 第48-50页 |
| (二)原核表达产物的免疫印迹验证 | 第50页 |
| (三)融合蛋白表达条件的优化 | 第50-58页 |
| 六、融合蛋白的溶解 | 第58-64页 |
| (一)融合蛋白表达形式的检测 | 第58-59页 |
| (二)低温诱导条件的优化 | 第59-60页 |
| (三)包涵体的溶解 | 第60-64页 |
| 七、融合蛋白的纯化 | 第64-67页 |
| (一)包涵体的洗涤 | 第64-65页 |
| (二)融合蛋白的镍亲和层析 | 第65-67页 |
| 八、融合蛋白的复性 | 第67-70页 |
| (一)Cripto-1_(29-168)融合蛋白的复性 | 第67-68页 |
| (二)triTH、TSP50_(114-349)、triTH-TSP50_(114-349)、triTH-Cripto-1_(29-168)融合蛋白的脉冲稀释复性 | 第68-69页 |
| (三)复性蛋白浓度的测定 | 第69-70页 |
| 九、融合蛋白对体外淋巴细胞转化的影响 | 第70-71页 |
| 第四部分 讨论 | 第71-74页 |
| 一、融合蛋白表达载体的构建 | 第71页 |
| 二、融合蛋白的表达、纯化及复性 | 第71-73页 |
| 三、融合蛋白的体外免疫原性分析 | 第73-74页 |
| 第五部分 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 附录 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 作者简介 | 第84页 |
