| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1 绪论 | 第17-32页 |
| 1.1 舞毒蛾研究现状 | 第17-18页 |
| 1.1.1 舞毒蛾危害性 | 第17页 |
| 1.1.2 舞毒蛾防治概况 | 第17-18页 |
| 1.2 鱼藤酮研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3 超气门蛋白研究进展 | 第20-22页 |
| 1.4 蜕皮激素应答相关基因 | 第22-23页 |
| 1.5 Halloween基因的发现与研究 | 第23-24页 |
| 1.6 RNAi研究进展 | 第24-29页 |
| 1.6.1 RNAi作用机制 | 第25-27页 |
| 1.6.2 RNAi技术在昆虫基因功能研究及防治中的应用 | 第27-29页 |
| 1.7 dsRNA转基因植物研究 | 第29-30页 |
| 1.8 本研究目的和意义 | 第30-32页 |
| 2 鱼藤酮对舞毒蛾的杀虫作用 | 第32-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第32页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第32页 |
| 2.1.2 主要试剂与仪器 | 第32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-34页 |
| 2.2.1 生物测定和致毒处理 | 第32-33页 |
| 2.2.2 CAT酶活性测定 | 第33-34页 |
| 2.2.3 鱼藤酮对舞毒蛾幼虫生长发育影响 | 第34页 |
| 2.2.4 数据处理 | 第34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-36页 |
| 2.3.1 鱼藤酮对舞毒蛾幼虫毒力测定 | 第34-35页 |
| 2.3.2 舞毒蛾幼虫CAT活性检测 | 第35-36页 |
| 2.3.3 鱼藤酮对舞毒蛾幼虫生长发育影响 | 第36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-39页 |
| 3 鱼藤酮胁迫舞毒蛾幼虫转录组分析 | 第39-65页 |
| 3.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 供试材料 | 第39页 |
| 3.1.2 主要试剂与仪器 | 第39-40页 |
| 3.2 研究方法 | 第40-46页 |
| 3.2.1 致毒处理 | 第40页 |
| 3.2.2 RNA提取及质量检测 | 第40-42页 |
| 3.2.3 舞毒蛾3龄幼虫转录组构建 | 第42-43页 |
| 3.2.4 生物信息学分析 | 第43-46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-64页 |
| 3.3.1 舞毒蛾幼虫总RNA提取及消化 | 第46-47页 |
| 3.3.2 原始测序数据及其质量控制 | 第47-49页 |
| 3.3.3 文库质量评估 | 第49-53页 |
| 3.3.4 基因表达量总体分析 | 第53-54页 |
| 3.3.5 差异表达基因筛选 | 第54-56页 |
| 3.3.6 差异表达基因聚类分析 | 第56页 |
| 3.3.7 差异表达基因功能注释和富集分析 | 第56-64页 |
| 3.4 本章小结 | 第64-65页 |
| 4 舞毒蛾LdUSP基因克隆与分析 | 第65-81页 |
| 4.1 实验材料 | 第65-66页 |
| 4.1.1 主要材料 | 第65页 |
| 4.1.2 主要试剂及仪器 | 第65-66页 |
| 4.1.3 主要试剂与培养基配制 | 第66页 |
| 4.2 实验方法 | 第66-70页 |
| 4.2.1 RNA提取 | 第66-67页 |
| 4.2.2 DNA消化 | 第67页 |
| 4.2.3 第一链cDNA的合成 | 第67-68页 |
| 4.2.4 LdUSP基因全长cDNA克隆 | 第68页 |
| 4.2.5 PCR产物胶回收 | 第68-69页 |
| 4.2.6 LdUSP基因连接及转化 | 第69-70页 |
| 4.2.7 摇菌和PCR反应 | 第70页 |
| 4.2.8 LdUSP基因凝胶电泳检测、测序 | 第70页 |
| 4.2.9 LdUSP基因生物信息学分析 | 第70页 |
| 4.3 结果与分析 | 第70-80页 |
| 4.3.1 舞毒蛾幼虫总RNA质量检测 | 第70-71页 |
| 4.3.2 LdUSP基因分析 | 第71-80页 |
| 4.4 讨论 | 第80-81页 |
| 5 舞毒蛾LdUSP基因表达分析及对杀虫剂鱼藤酮胁迫响应 | 第81-86页 |
| 5.1 实验材料 | 第81页 |
| 5.1.1 供试材料 | 第81页 |
| 5.1.2 主要试剂及仪器 | 第81页 |
| 5.2 实验方法 | 第81-82页 |
| 5.2.1 致毒处理 | 第81-82页 |
| 5.2.2 LdUSP基因表达量测定 | 第82页 |
| 5.2.3 数据统计与分析 | 第82页 |
| 5.3 结果与分析 | 第82-85页 |
| 5.3.1 LdUSP基因的表达分析 | 第82-84页 |
| 5.3.2 鱼藤酮对LdUSP基因表达量影响 | 第84-85页 |
| 5.4 讨论 | 第85-86页 |
| 6 RNAi干扰舞毒蛾LdUSP基因功能分析 | 第86-99页 |
| 6.1 试验材料 | 第86页 |
| 6.1.1 供试昆虫 | 第86页 |
| 6.1.2 主要试剂及仪器 | 第86页 |
| 6.2 实验方法 | 第86-89页 |
| 6.2.1 RNA提取及cDNA合成 | 第86-87页 |
| 6.2.2 LdUSP基因dsRNA的合成 | 第87-89页 |
| 6.2.3 舞毒蛾幼虫生长发育指标测定 | 第89页 |
| 6.2.4 舞毒蛾LdUSP基因表达量测定 | 第89页 |
| 6.3 结果与分析 | 第89-97页 |
| 6.3.1 PCR扩增目的片段检测 | 第89-90页 |
| 6.3.2 dsRNA片段质量检测 | 第90-91页 |
| 6.3.3 LdUSP沉默对舞毒蛾生长发育影响 | 第91页 |
| 6.3.4 LdUSP基因表达量 | 第91-92页 |
| 6.3.5 LdUSP基因沉默对蜕皮激素应答基因表达量的影响 | 第92-95页 |
| 6.3.6 LdUSP基因沉默对Halloween基因表达量的影响 | 第95-97页 |
| 6.3.7 LdUSP基因沉默对舞毒蛾幼虫鲜重影响 | 第97页 |
| 6.4 讨论 | 第97-99页 |
| 7 培育转基因杨树进行舞毒蛾RNAi的研究 | 第99-115页 |
| 7.1 实验材料 | 第99-100页 |
| 7.1.1 植物材料 | 第99页 |
| 7.1.2 菌种与载体 | 第99页 |
| 7.1.3 主要试剂及仪器设备 | 第99页 |
| 7.1.4 主要试剂与培养基配制 | 第99-100页 |
| 7.2 实验方法 | 第100-106页 |
| 7.2.1 干扰载体的构建 | 第100页 |
| 7.2.2 pCAMBIA2300-PDK中间载体构建 | 第100-102页 |
| 7.2.3 pCAMBIA2300-gene-PDK-gene载体的构建 | 第102-103页 |
| 7.2.4 农杆菌感受态细胞的制备 | 第103-104页 |
| 7.2.5 农杆菌感受态细胞的转化 | 第104页 |
| 7.2.6 酶切检测转化质粒 | 第104页 |
| 7.2.7 84K杨的遗传转化 | 第104-105页 |
| 7.2.8 鉴定阳性植株 | 第105-106页 |
| 7.2.9 转基因杨树对舞毒蛾LdUSP基因沉默效果检测 | 第106页 |
| 7.3 结果与分析 | 第106-113页 |
| 7.3.1 RNAi干扰载体的构建 | 第106-110页 |
| 7.3.2 转基因植株的获得 | 第110-111页 |
| 7.3.3 抗性植株PCR检测 | 第111-112页 |
| 7.3.4 转基因植株对舞毒蛾把标mRNA的影响 | 第112-113页 |
| 7.3.5 转基因植株对舞毒蛾幼虫生长发育的影响 | 第113页 |
| 7.4 讨论 | 第113-115页 |
| 结论 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-130页 |
| 附录 | 第130-131页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第131-132页 |
| 致谢 | 第132-134页 |
| 附件 | 第134-135页 |
