| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第10-19页 |
| 1.1 新城疫病毒概述 | 第10页 |
| 1.2 新城疫病毒的一般特征 | 第10-12页 |
| 1.2.1 新城疫病毒的形态结构 | 第10-11页 |
| 1.2.2 新城疫病毒的理化特征 | 第11页 |
| 1.2.3 新城疫病毒的复制 | 第11-12页 |
| 1.3 新城疫病毒的基因组结构及其编码蛋白 | 第12-17页 |
| 1.3.1 基因组结构 | 第12-13页 |
| 1.3.2 新城疫病毒编码蛋白及其结构与功能 | 第13-17页 |
| 1.4 实验室诊断技术 | 第17-18页 |
| 1.4.1 病原检查 | 第17页 |
| 1.4.2 血清学试验 | 第17-18页 |
| 1.4.3 反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第18页 |
| 1.5 研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 研究的主要内容 | 第19-34页 |
| 2.1 试验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 病料来源 | 第19页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试验试剂及抗体 | 第19页 |
| 2.1.4 主要试验仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 水貂源新城疫病毒的分离鉴定 | 第20-24页 |
| 2.2.1 临床病例的流行病学、临床症状及组织病理学观察 | 第20页 |
| 2.2.2 病毒分离培养 | 第20页 |
| 2.2.3 病毒鉴定 | 第20页 |
| 2.2.4 PCR检测 | 第20-24页 |
| 2.2.5 血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验 | 第24页 |
| 2.3 水貂源新城疫病毒分离株的致病性研究 | 第24-26页 |
| 2.3.1 鸡胚半数感染量(EID_(50))的测定 | 第24-25页 |
| 2.3.2 鸡胚最小致死量平均死亡时间(MDT)的测定 | 第25页 |
| 2.3.3 1日龄SPF雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)的测定 | 第25页 |
| 2.3.4 6周龄SPF鸡静脉内接种致病指数(IVPI)的测定 | 第25-26页 |
| 2.3.5 动物回归实验 | 第26页 |
| 2.4 水貂源新城疫病毒全基因组克隆 | 第26-27页 |
| 2.4.1 引物设计与合成 | 第26页 |
| 2.4.2 全基因组的克隆 | 第26-27页 |
| 2.4.3 全基因组序列的拼接 | 第27页 |
| 2.5 水貂源新城疫病毒分离株的生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 2.5.1 全基因组序列的比对及分析 | 第27-28页 |
| 2.5.2 HN蛋白结构预测 | 第28页 |
| 2.6 水貂源新城疫病毒分离株HN基因主要抗原区域的原核表达及纯化 | 第28-31页 |
| 2.6.1 引物设计与合成 | 第28页 |
| 2.6.2 PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.6.3 重组表达载体的构建及鉴定 | 第29-30页 |
| 2.6.4 HN蛋白的原核表达与鉴定 | 第30页 |
| 2.6.5 主要抗原域蛋白pGEX-mNDV-HN蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| 2.7 兔抗水貂源新城疫病毒HN蛋白多克隆抗体的制备 | 第31-32页 |
| 2.7.1 兔抗水貂源新城疫病毒HN蛋白多克隆抗体的制备 | 第31页 |
| 2.7.2 兔抗水貂源新城疫病毒HN蛋白多克隆抗体的效价测定 | 第31-32页 |
| 2.7.3 主要抗原区域表达产物的Western Blot分析 | 第32页 |
| 2.8 间接ELISA检测方法的建立 | 第32-34页 |
| 2.8.1 ELISA抗原最佳包被浓度及血清稀释度的筛选 | 第32-33页 |
| 2.8.2 最佳封闭液的选择 | 第33页 |
| 2.8.3 最佳二抗工作浓度的确定 | 第33页 |
| 2.8.4 底物最佳作用时间的优化 | 第33页 |
| 2.8.5 ELISA阴阳性临界点的确定和结果判断方法 | 第33页 |
| 2.8.6 特异性、敏感性和符合率试验特异性试验 | 第33页 |
| 2.8.7 ELISA方法和HI试验的灵敏度比较 | 第33页 |
| 2.8.8 临床样品的检测 | 第33-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-50页 |
| 3.1 水貂源新城疫病毒的分离鉴定结果 | 第34-35页 |
| 3.1.1 临床病例的流行病学、临床症状及组织病理学观察结果 | 第34页 |
| 3.1.2 病毒电镜结果 | 第34-35页 |
| 3.1.3 PCR检测及测序结果 | 第35页 |
| 3.1.4 血凝与血凝抑制试验 | 第35页 |
| 3.2 病毒的致病性研究结果 | 第35-37页 |
| 3.2.1 半数感染量测定结果 | 第35页 |
| 3.2.2 病毒生物学毒力测定结果 | 第35-36页 |
| 3.2.3 动物回归试验结果 | 第36-37页 |
| 3.3 水貂源新城疫病毒全基因组克隆结果 | 第37-44页 |
| 3.3.1 扩增全基因引物序列 | 第37页 |
| 3.3.2 分离毒株RT-PCR结果 | 第37页 |
| 3.3.3 分离毒株全基因序列分析 | 第37-38页 |
| 3.3.4 各基因编码蛋白分析 | 第38-39页 |
| 3.3.5 mNDV-01-HLJ分离株F和HN蛋白氨基酸序列遗传进化分析 | 第39-40页 |
| 3.3.6 mNDV-01-HLJ分离株HN蛋白氨基酸序列同源性分析 | 第40-41页 |
| 3.3.7 水貂源新城疫病毒分离株HN基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第41-44页 |
| 3.4 水貂源新城疫病毒分离株HN基因的截短表达 | 第44-46页 |
| 3.4.1 HN基因主要抗原区域的PCR扩增 | 第44-45页 |
| 3.4.2 表达载体的构建与鉴定 | 第45-46页 |
| 3.4.3 重组蛋白的原核表达 | 第46页 |
| 3.5 兔抗水貂源新城疫病毒HN蛋白多克隆抗体的制备与鉴定 | 第46-47页 |
| 3.6 重组蛋白的Western blot鉴定 | 第47页 |
| 3.7 间接ELISA检测方法的建立 | 第47-50页 |
| 3.7.1 ELISA抗原最佳包被浓度及血清稀释度的筛选 | 第47页 |
| 3.7.2 最佳封闭液的选择 | 第47-48页 |
| 3.7.3 最佳二抗工作浓度的确定 | 第48页 |
| 3.7.4 底物最佳作用时间的优化 | 第48页 |
| 3.7.5 ELISA阴阳性临界点的确定及结果判断方法 | 第48页 |
| 3.7.6 ELISA方法的特异性、敏感性试验 | 第48页 |
| 3.7.7 ELISA方法的符合率试验 | 第48-49页 |
| 3.7.8 临床应用 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 4.1 新城疫病毒的流行特点 | 第50-51页 |
| 4.2 分离毒株的致病性结果分析 | 第51页 |
| 4.3 分离毒株的HN基因及其编码蛋白的分子特征 | 第51页 |
| 4.4 间接ELISA检测方法的初步建立 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 附录 | 第63-66页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
