| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 精氨酸的合成与分解代谢 | 第11-13页 |
| 1.1.1 细菌中的精氨酸 | 第11页 |
| 1.1.2 细菌中精氨酸合成途径 | 第11-12页 |
| 1.1.3 细菌中精氨酸分解代谢途径 | 第12-13页 |
| 1.2 细菌中的ADI途径 | 第13-15页 |
| 1.2.1 ADI途径的发现 | 第13-14页 |
| 1.2.2 ADI途径及其作用 | 第14-15页 |
| 1.3 细菌中的精氨酸脱亚氨酶(ADI) | 第15-19页 |
| 1.3.1 精氨酸脱亚氨酶的结构 | 第15页 |
| 1.3.2 不同细菌来源的精氨酸脱亚氨酶(ADI)的活性 | 第15-16页 |
| 1.3.3 精氨酸脱亚氨酶系统(ADS) | 第16-17页 |
| 1.3.4 精氨酸脱亚氨酶(ADI)相关基因及功能 | 第17-19页 |
| 1.4 立题依据 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-25页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 供试质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.3 供试引物 | 第22页 |
| 2.1.4 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.5 试剂 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-28页 |
| 2.2.1 小量提取质粒方法 | 第25页 |
| 2.2.2 蜡样芽孢杆菌基因组提取方法 | 第25页 |
| 2.2.3 E.coli pir116细菌热击感受态的制备 | 第25页 |
| 2.2.4 大肠杆菌电击感受态的制备方法 | 第25-26页 |
| 2.2.5 蜡样芽孢杆菌0-9及其缺陷型菌株感受态的制备方法 | 第26页 |
| 2.2.6 蛋白的诱导表达及纯化 | 第26-28页 |
| 2.3 实验过程 | 第28-37页 |
| 2.3.1 0-9基因组同源比对及引物的设计 | 第28页 |
| 2.3.2 基因缺陷型菌株的获得 | 第28-30页 |
| 2.3.3 基因缺陷菌株的生物学性能测定及比较 | 第30-33页 |
| 2.3.4 ArcA蛋白表达菌株的获取 | 第33页 |
| 2.3.5 ArcA蛋白的表达、纯化及酶活测定 | 第33-34页 |
| 2.3.6 获取arcA基因缺陷型菌株的互补菌株 | 第34-35页 |
| 2.3.7 arcA基因互补菌株的生物学特征测定 | 第35-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-57页 |
| 3.1 基因敲除菌株的获取 | 第37-39页 |
| 3.1.1 基因敲除载体的构建 | 第37页 |
| 3.1.2 基因缺陷型菌株的筛选 | 第37-38页 |
| 3.1.3 基因缺陷型菌株的鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2 基因缺陷型菌株的生物学性能的测定 | 第39-47页 |
| 3.2.1 生物膜形成能力的测定 | 第39-40页 |
| 3.2.2 胞外蛋白酶产生能力的测定 | 第40-41页 |
| 3.2.3 胞外淀粉酶产生能力的测定 | 第41-42页 |
| 3.2.4 菌体在不同条件下的生长情况及比较 | 第42-44页 |
| 3.2.5 菌落形态的测定 | 第44-45页 |
| 3.2.6 竞争能力的测定 | 第45页 |
| 3.2.7 定殖能力的测定 | 第45-46页 |
| 3.2.8 arcA基因的表达量的测定 | 第46-47页 |
| 3.3 ArcA蛋白表达菌株的构建及酶活的测定 | 第47-50页 |
| 3.3.1 ArcA蛋白表达菌株的构建 | 第47-48页 |
| 3.3.2 蛋白的表达、纯化及酶活的测定 | 第48-50页 |
| 3.4 构建arcA基因缺陷型菌株的互补菌株 | 第50-52页 |
| 3.4.1 构建pMAD-chi质粒 | 第50页 |
| 3.4.2 构建arcA基因互补载体 | 第50-51页 |
| 3.4.3 获得arcA基因互补菌株 | 第51-52页 |
| 3.5 互补菌株的表型测定 | 第52-57页 |
| 3.5.1 生物膜形成能力的测定 | 第52-53页 |
| 3.5.2 胞外蛋白酶的测定 | 第53-54页 |
| 3.5.3 胞外蛋白酶产生能力的测定及比较 | 第54-55页 |
| 3.5.4 互补菌株在不同条件下的生长情况 | 第55-57页 |
| 4 结论 | 第57-59页 |
| 5 讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
