| 摘要 | 第3-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第1章 癌-睾丸抗原基因MAEL的研究进展 | 第16-24页 |
| 1.1 癌-睾丸抗原的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.1.1 癌-睾丸抗原的发现及命名和分类 | 第16页 |
| 1.1.2 癌-睾丸抗原基因在肿瘤组织中的表达特点及抗原的功能 | 第16-17页 |
| 1.1.3 癌-睾丸抗原基因的表达调控 | 第17-19页 |
| 1.1.4 癌-睾丸抗原在癌症基础研究中的应用 | 第19-20页 |
| 1.2 MAEL基因功能的研究进展 | 第20-23页 |
| 1.2.1 MAEL基因在生殖细胞中的功能 | 第20-22页 |
| 1.2.2 MAEL在癌症中的作用 | 第22-23页 |
| 1.3 研究思路 | 第23-24页 |
| 第2章 MAEL在乳腺癌中的作用及其分子机制 | 第24-43页 |
| 2.1 前言 | 第24-26页 |
| 2.1.1 乳腺癌研究进展 | 第24-25页 |
| 2.1.2 乳腺癌动物模型在乳腺癌研究中的应用 | 第25-26页 |
| 2.2 材料与方法 | 第26-34页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.2.1.1 组织芯片 | 第26页 |
| 2.2.1.2 MMTV-CRE转基因小鼠、HBL-100细胞株、过表达慢病毒 | 第26页 |
| 2.2.1.3 质粒与菌株 | 第26页 |
| 2.2.1.4 细胞培养及相关试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.1.5 引物 | 第27-28页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第28-34页 |
| 2.2.2.1 免疫组织化学染色 | 第28-29页 |
| 2.2.2.2 慢病毒感染构建稳定细胞株 | 第29页 |
| 2.2.2.3 打靶载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.2.4 ES细胞培养 | 第30页 |
| 2.2.2.5 ES细胞电穿孔DNA转移 | 第30页 |
| 2.2.2.6 正负药物筛选 | 第30页 |
| 2.2.2.7 双抗性细胞克隆的挑取及培养 | 第30页 |
| 2.2.2.8 ES细胞基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.2.9 同源重组克隆的PCR鉴定 | 第31页 |
| 2.2.2.10 ES细胞的囊胚注射及胚胎移植 | 第31页 |
| 2.2.2.11 嵌合体小鼠育种及PCR鉴定小鼠基因型 | 第31页 |
| 2.2.2.12 小鼠乳腺组织形态分析 | 第31-32页 |
| 2.2.2.13 小鼠基因组DNA提取 | 第32-33页 |
| 2.2.2.14 小鼠基因型鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-41页 |
| 2.3.1 在乳腺癌组织MAEL蛋白水平表达量分析 | 第34-35页 |
| 2.3.2 正常乳腺细胞系HBL100中过表达MAEL基因促进细胞增殖和克隆形成 | 第35页 |
| 2.3.3 MAEL基因敲入小鼠模型的构建 | 第35-39页 |
| 2.3.3.1 Myc-MAEL基因Rosa26位点knock-in小鼠打靶载体构建 | 第35-37页 |
| 2.3.3.2 同源重组ES细胞鉴定 | 第37页 |
| 2.3.3.3 嵌合体雄鼠的获得与繁育 | 第37-38页 |
| 2.3.3.4 MAEL基因的Loxp转基因小鼠纯合子的获得 | 第38-39页 |
| 2.3.4 MMTV-MAEL转基因小鼠构建 | 第39-41页 |
| 2.3.4.1 MMTV-MAEL转基因小鼠纯合子的获得 | 第39-40页 |
| 2.3.4.2 过表达MAEL转基因小鼠对乳腺导管发育与形成的影响 | 第40-41页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第41-43页 |
| 第3章 MAEL在胃癌中的作用及其分子机制 | 第43-83页 |
| 3.1 前言 | 第43-47页 |
| 3.1.1 胃癌的研究进展 | 第43-44页 |
| 3.1.2 大数据在癌症中的应用 | 第44-47页 |
| 3.2 材料与方法 | 第47-65页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第47-53页 |
| 3.2.1.1 细胞株和菌株 | 第47页 |
| 3.2.1.2 病理组织样本 | 第47页 |
| 3.2.1.3 载体和工具酶 | 第47页 |
| 3.2.1.4 引物序列 | 第47-48页 |
| 3.2.1.5 主要试剂与试剂盒 | 第48页 |
| 3.2.1.6 抗体 | 第48-49页 |
| 3.2.1.7 所需溶液 | 第49-52页 |
| 3.2.1.8 仪器设备 | 第52-53页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第53-65页 |
| 3.2.2.1 细胞培养和转染 | 第53-54页 |
| 3.2.2.2 细胞冻存 | 第54页 |
| 3.2.2.3 质粒构建 | 第54-58页 |
| 3.2.2.4 免疫共沉淀实验 | 第58-59页 |
| 3.2.2.5 蛋白质印迹(Weste blotting) | 第59-60页 |
| 3.2.2.6 慢病毒感染及稳定细胞株筛选 | 第60-61页 |
| 3.2.2.7 ILKAP腺病毒扩增与纯化 | 第61页 |
| 3.2.2.8 细胞计数法 | 第61页 |
| 3.2.2.9 细胞增殖测定(MTT实验) | 第61-62页 |
| 3.2.2.10 克隆形成实验 | 第62页 |
| 3.2.2.11 细胞划痕实验 | 第62页 |
| 3.2.2.12 Transwell法检测细胞侵袭能力 | 第62-63页 |
| 3.2.2.13 裸鼠成瘤实验 | 第63页 |
| 3.2.2.14 RNA抽提、反转录及荧光定量PCR实验 | 第63-64页 |
| 3.2.2.15 生物信息学分析 | 第64页 |
| 3.2.2.16 甲基化分析 | 第64-65页 |
| 3.2.2.17 统计学分析应用 | 第65页 |
| 3.3 结果与分析 | 第65-80页 |
| 3.3.1 胃癌组织中MALE基因高表达的患者预后差 | 第65-67页 |
| 3.3.2 MAEL在胃癌中表达受甲基化调控 | 第67-69页 |
| 3.3.3 敲低MAEL基因抑制胃癌进展 | 第69-73页 |
| 3.3.4 MAEL与ILKAP相互作用并且促进ILKAP蛋白的降解 | 第73-75页 |
| 3.3.5 MAEL通过抑制ILAKP促进p38 CHK1和RSK2的磷酸化 | 第75-77页 |
| 3.3.6 ILKAP抑制MAEL的致癌作用 | 第77-80页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第80-83页 |
| 第4章 结论和研究展望 | 第83-85页 |
| 4.1 结论 | 第83-84页 |
| 4.2 研究展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-98页 |
| 附录 | 第98-100页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
