中文摘要 | 第4-7页 |
Abstract | 第7-10页 |
前言 | 第14-21页 |
1. 结直肠癌诊疗进展 | 第14-17页 |
2. DDX46概述 | 第17-21页 |
第一部分 结直肠癌组织中DDX46的表达及临床意义 | 第21-39页 |
实验材料 | 第21-23页 |
1. 组织样本 | 第21-22页 |
2. 试剂 | 第22页 |
3. 仪器 | 第22-23页 |
实验方法 | 第23-24页 |
1. 免疫组织化学染色 | 第23-24页 |
2. 评价方法 | 第24页 |
3. 统计学分析 | 第24页 |
结果 | 第24-33页 |
1. 结直肠癌病例组织病理学特征 | 第24-26页 |
2. DDX46蛋白在结直肠癌组织中高表达 | 第26-28页 |
3. DDX46蛋白表达水平与结直肠癌临床病理学分析 | 第28-29页 |
4. C-erbB-2、KI-67、P53和nm23蛋白在结直肠癌组织中的表达 | 第29-30页 |
5. 结直肠癌DDX46与C-erbB-2、KI-67、P53和nm23蛋白表达相关性 | 第30-31页 |
6. 结直肠癌DDX46表达与生存期相关性 | 第31-33页 |
讨论 | 第33-39页 |
第二部分 DDX46在结直肠癌细胞中的生物学功能研究 | 第39-67页 |
实验材料 | 第39-44页 |
1. 细胞株 | 第39页 |
2. 主要实验试剂 | 第39-41页 |
3. 基本实验试剂配制 | 第41-42页 |
4. RT-PCR引物 | 第42-43页 |
5. 主要实验仪器 | 第43-44页 |
实验方法 | 第44-54页 |
1. DDX46基因RNA干扰慢病毒载体制备和生产 | 第44-46页 |
2. 细胞培养和冻存 | 第46-47页 |
3. 质粒提取实验 | 第47页 |
4. 慢病毒转染 | 第47-48页 |
5. 荧光定量PCR | 第48-51页 |
6. 蛋白提取与Western Blot | 第51-52页 |
7. 细胞生长测定方法 | 第52页 |
8. 细胞活力测定 | 第52-53页 |
9. 克隆形成实验 | 第53页 |
10. 细胞凋亡的流式细胞仪分析 | 第53-54页 |
11. 数据分析 | 第54页 |
结果 | 第54-64页 |
1. 慢病毒DDX46沉默有效降低DDX46表达 | 第54-57页 |
2. DDX46沉默明显抑制结直肠癌细胞生长 | 第57-59页 |
3. DDX46沉默明显抑制结直肠癌细胞的集落形成 | 第59-60页 |
4. DDX46沉默诱导CRC细胞凋亡 | 第60-62页 |
5. DDX46沉默诱导结直肠癌细胞周期阻滞在G0/G1期 | 第62-64页 |
讨论 | 第64-67页 |
第三部分:DDX46对结直肠癌细胞电离辐射敏感性的影响 | 第67-81页 |
实验材料 | 第67-70页 |
1. 细胞株 | 第67页 |
2. 主要实验试剂 | 第67-68页 |
3. 基本实验试剂配制 | 第68-70页 |
4. 主要实验仪器 | 第70页 |
实验方法 | 第70-74页 |
1. 细胞培养和冻存 | 第70-71页 |
2. 细胞活力测定 | 第71-72页 |
3. 蛋白提取与Western Blot | 第72-73页 |
4. γ-H2AX的免疫荧光 | 第73-74页 |
5. 人结肠癌细胞株SW480的X射线照射 | 第74页 |
6. 数据分析 | 第74页 |
结果 | 第74-77页 |
1. DDX46沉默联合不同剂量X线照射SW480细胞 | 第74-76页 |
2. DDX46沉默明显抑制结肠癌细胞受照后引起DNA损伤的修复 | 第76-77页 |
讨论 | 第77-81页 |
1、DDX46沉默对结直肠癌细胞电离辐射敏感性的影响 | 第78页 |
2、DDX46沉默对结直肠癌细胞电离辐射DNA损伤修复的可能机制 | 第78-81页 |
参考文献 | 第81-97页 |
结论 | 第97页 |
创新点 | 第97-98页 |
后续研究及展望 | 第98-99页 |
综述 DEAD box家族蛋白与结直肠癌 | 第99-115页 |
参考文献 | 第106-115页 |
英文缩略词表 | 第115-117页 |
攻读博士学位期间公开发表的论文 | 第117-118页 |
致谢 | 第118-119页 |