| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第10-19页 |
| 1 昆虫的天然免疫系统 | 第10-13页 |
| 2 模式识别受体在昆虫天然免疫中的作用 | 第13-14页 |
| 2.1 Toll和Imd两种信号途径 | 第13-14页 |
| 2.2 模式识别受体 | 第14页 |
| 3 国内外关于βGRP的研究进展 | 第14-15页 |
| 4 研究目的和意义 | 第15-16页 |
| 参考文献 | 第16-19页 |
| 1 前言 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-35页 |
| 2.1 供试昆虫 | 第20页 |
| 2.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.3 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.4 总RNA提取 | 第21页 |
| 2.5 cDNA第一链的合成 | 第21-22页 |
| 2.6 亚洲玉米螟幼虫β-1,3-GRP基因中间片段扩增 | 第22-24页 |
| 2.6.1 引物设计与合成 | 第22页 |
| 2.6.2 Of-β-1,3-GRP基因中间片段RT-PCR扩增 | 第22页 |
| 2.6.3 目的基因片段的回收纯化 | 第22-23页 |
| 2.6.4 目的片段与克隆载体连接 | 第23页 |
| 2.6.5 连接载体转化 | 第23页 |
| 2.6.6 单菌落PCR检测 | 第23页 |
| 2.6.7 测序 | 第23-24页 |
| 2.7 Of-β-1,3-GRP基因的3'-RACE | 第24-25页 |
| 2.7.1 引物设计 | 第24页 |
| 2.7.2 操作步骤 | 第24-25页 |
| 2.7.3 3'-RACE产物的克隆测序 | 第25页 |
| 2.8 Of-β-1,3-GRP基因的5'-RACE | 第25-29页 |
| 2.8.1 Takara 5'-RACE反应原理和引物设计 | 第25-26页 |
| 2.8.2 操作步骤 | 第26-29页 |
| 2.8.3 5'-RACE产物的克隆测序 | 第29页 |
| 2.9 序列的生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 2.9.1 数据库搜索及亚洲玉米螟Of-β-1,3-GRP基因编码蛋白的理化性质分析 | 第29页 |
| 2.9.2 亚洲玉米螟Of-β-1,3-GRP基因编码蛋白的结构和功能预测 | 第29-30页 |
| 2.9.3 基于昆虫Of-β-1,3-GRP核苷酸序列推导的氨基酸序列的系统进化树构建 | 第30页 |
| 2.10 Of-β-1,3-GRP重组蛋白原核表达探索 | 第30-33页 |
| 2.10.1 重组表达质粒pET-28b(+)-Of-β-1,3-GRP的构建 | 第30-33页 |
| 2.10.2 重组表达 | 第33页 |
| 2.11 亚洲玉米螟Of-β-1,3-GRP基因表达的Real time PCR检测 | 第33-35页 |
| 2.11.1 细菌诱导物的制备 | 第33页 |
| 2.11.2 亚洲玉米螟幼虫细菌诱导物的注射及解剖 | 第33-34页 |
| 2.11.3 Real time PCR检测 | 第34-35页 |
| 2.11.4 数据分析 | 第35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-57页 |
| 3.1 Of-β-1,3-GRP基因cDNA全长序列 | 第35-39页 |
| 3.1.1 Of-β-1,3-GRP中间片段的克隆 | 第35-37页 |
| 3.1.2 Of-β-1,3-GRP基因全长cDNA序列的3'RACE和5'RACE | 第37-38页 |
| 3.1.3 Of-β-1,3-GRP基因全长cDNA序列的克隆 | 第38-39页 |
| 3.2 Of-β-1,3-GRP基因的生物信息学分析 | 第39-47页 |
| 3.2.1 Of-β-1,3-GRP基因的核苷酸序列和氨基酸序列 | 第39-41页 |
| 3.2.2 Of-β-1,3-GRP基因核苷酸序列和氨基酸序列的BlastP分析 | 第41-43页 |
| 3.2.3 Of-β-1,3-GRP基因的系统进化树 | 第43页 |
| 3.2.4 Of-β-1,3-GRP基因信号肽、跨膜结构、翻译后修饰以及疏水性分析 | 第43-46页 |
| 3.2.5 Of-β-1,3-GRP的三维结构以及功能结构域分析 | 第46-47页 |
| 3.3 Of-β-1,3-GRP基因的原核表达 | 第47-52页 |
| 3.3.1 Of-β-1,3-GRP基因表达载体的构建 | 第47-50页 |
| 3.3.2 pET-28b-Of-β-1,3-GRP原核表达条件的筛选 | 第50-52页 |
| 3.4 亚洲玉米螟幼虫Of-β-1,3-GRP基因mRNA表达水平分析 | 第52-57页 |
| 3.4.1 不同处理后5龄幼虫血细胞中Of-β-1,3-GRP基因mRNA水平的表达量变化 | 第53-54页 |
| 3.4.2 不同处理后5龄幼虫中肠中Of-β-1,3-GRP基因mRNA水平的表达量变化 | 第54-55页 |
| 3.4.3 不同处理后5龄幼虫脂肪体中Of-β-1,3-GRP基因mRNA水平的表达量变化 | 第55-56页 |
| 3.4.4 不同处理后5龄幼虫体壁中Of-β-1,3-GRP基因mRNA水平的表达量变化 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-65页 |
| 4.1 Of-β-1,3-βGRP的序列和蛋白结构分析 | 第57-59页 |
| 4.2 Of-β-1,3-βGRP的原核表达、纯化及Western blotting分析 | 第59-61页 |
| 4.3 细菌注射对Of-β-1,3-GRP基因mRNA表达水平的影响 | 第61-63页 |
| 4.4 展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第70-71页 |
