| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 前言 | 第11-23页 |
| 1 细菌耐药性的研究现状 | 第11-12页 |
| ·细菌耐药性的产生和发展 | 第11页 |
| ·耐药性的分类 | 第11-12页 |
| 2 与细菌多重耐药性相关的主动转运系统的分子生物学机制 | 第12-14页 |
| ·与细菌耐药性有关的主动转运系统的类别 | 第13页 |
| ·RND多重药物主动外排系统 | 第13页 |
| ·药物主动外排泵系统与其它的细菌耐药机制具有协同作用 | 第13-14页 |
| 3 大肠埃希菌多重耐药性研究进展 | 第14-16页 |
| ·大肠杆菌耐药性研究现状 | 第14-15页 |
| ·大肠杆菌的多重耐药机制 | 第15-16页 |
| 4 大肠杆菌的多药外排泵AcrAB-TolC系统的研究动态 | 第16-18页 |
| ·大肠杆菌的多药外排泵AcrAB-TolC的结构特点 | 第16页 |
| ·多重耐药大肠肝菌外排系统AcrAB的研究进展 | 第16-17页 |
| ·大肠杆菌多重耐药性问题的研究现状 | 第17-18页 |
| 5 耐药性抑制剂的研究概况 | 第18-19页 |
| 6 中药消除细菌耐药性的研究现状 | 第19-21页 |
| ·中药在消除质粒方面应用的研究 | 第19-20页 |
| ·中药作为外排泵抑制剂的研究 | 第20页 |
| ·中药被用作多重耐药抑制剂方面的研究 | 第20-21页 |
| 7 本课题的研究目的及意义 | 第21-23页 |
| 材料与方法 | 第23-29页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| ·试验菌种及培养基 | 第23页 |
| ·试验药物 | 第23页 |
| ·DNA提取所需材料 | 第23页 |
| ·PCR法扩增AcrA基因所需材料 | 第23页 |
| ·试验仪器 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-29页 |
| ·细菌的培养 | 第24页 |
| ·细菌的鉴定 | 第24页 |
| ·耐药菌的耐药稳定性试验 | 第24-25页 |
| ·耐药性抑制试验 | 第25页 |
| ·中药"连黄"(精提,粗提)对大肠埃希菌的MIC测定 | 第25页 |
| ·PCR法检测大肠埃希菌的耐药基因AcrA | 第25-27页 |
| ·最适退火温度的筛选 | 第27页 |
| ·特异性试验 | 第27页 |
| ·中药"连黄"(精提,粗提)使耐药基因AcrA的失活试验 | 第27页 |
| ·PCR检测经中药"连黄"(精提,粗提)作用后的AcrA基因 | 第27页 |
| ·实时荧光定PCR阳性标准品的制备 | 第27页 |
| ·中药"连黄"(精提,粗提)作用后各AcrA总RNA反转录产物(即待测靶序列)的制备 | 第27-28页 |
| ·实时荧光定量PCR反应标准曲线的建立 | 第28页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第28-29页 |
| 结果 | 第29-39页 |
| 1 细菌的鉴定 | 第29页 |
| 2 诱导耐药大肠埃希菌DL1的耐药性稳定性试验结果 | 第29-30页 |
| 3 中药"连黄"(精提,粗提)对大肠埃希菌的MIC测定结果 | 第30-31页 |
| 4 耐药性抑制试验结果 | 第31-32页 |
| ·平板点种法试验结果 | 第31-32页 |
| 5 中药"连黄"(精提,粗提)作用前后模板DNA含量测定结果 | 第32页 |
| ·中药"连黄"(精提,粗提)作用前模板 | 第32页 |
| ·中药"连黄"(精提,粗提)作用后模板DNA含量 | 第32页 |
| 6 中药"连黄"(精提,粗提)作用前后AcrA基因PCR扩增产物的电泳分析 | 第32-34页 |
| ·中药"连黄"作用前AcrA基因PCR扩增产物电泳分析 | 第32-33页 |
| ·连黄(粗提,精提)作用后AcrA基因PCR扩增产物电泳分析 | 第33-34页 |
| 7 最适退火温度筛选试验结果 | 第34页 |
| 8 特异性试验结果 | 第34-35页 |
| 9 目的片段的测序分析 | 第35-36页 |
| ·碱基序列同源性分析结果 | 第35页 |
| ·氨基酸同源性分析结果 | 第35页 |
| ·中药复方制剂作用前后耐药基因AcrA的碱基序列对比分析 | 第35-36页 |
| 10 阳性标准品的制备 | 第36-37页 |
| 11 待测靶序列的制备 | 第37页 |
| 12 标准曲线 | 第37-38页 |
| 13 实时荧光定量PCR结果 | 第38-39页 |
| 讨论 | 第39-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 作者简介 | 第49-50页 |
| 附录(攻读学位期间发表论文目录) | 第50页 |
