| 中文摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第10-17页 |
| 1.1 木质纤维素燃料乙醇的生产及其意义 | 第10-11页 |
| 1.2 木质纤维素生产燃料乙醇菌种选育 | 第11-13页 |
| 1.2.1 木质纤维素生产燃料乙醇菌种选育的主要手段 | 第11-12页 |
| 1.2.2 原生质体融合技术在酿酒酵母工程菌构建中的应用 | 第12-13页 |
| 1.3 原生质体融合子的筛选方法 | 第13-14页 |
| 1.3.1 原生质体融合子筛选的常规方法 | 第13页 |
| 1.3.2 原生质体融合子筛选的分子生物学方法 | 第13-14页 |
| 1.4 本课题研究的目的及意义 | 第14-15页 |
| 1.4.1 本课题研究的背景、思路和目的 | 第14-15页 |
| 1.4.2 本课题研究的意义 | 第15页 |
| 1.5 本研究的主要技术路线 | 第15-16页 |
| 1.6 课题资助名称 | 第16-17页 |
| 第2章 材料与方法 | 第17-52页 |
| 2.1 试验材料 | 第17-26页 |
| 2.1.1 供试菌株及质粒载体 | 第17-19页 |
| 2.1.2 PCR扩增引物 | 第19-20页 |
| 2.1.3 培养基 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要生物化学及分子生物学试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.5 主要生化试剂及缓冲液配制方法 | 第22-24页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第24-26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-52页 |
| 2.2.1 ADHp、ADHt及Blasticidin抗性基因bsd的克隆与测序 | 第26-36页 |
| 2.2.2 报告基因gusA的获得 | 第36页 |
| 2.2.3 酿酒酵母表达载体pZLY1的构建 | 第36-39页 |
| 2.2.4 酿酒酵母表达载体pZLY2的构建 | 第39-46页 |
| 2.2.5 G418对休哈塔假丝酵母20335最低抑菌浓度的测定 | 第46-47页 |
| 2.2.6 Blasticidin对酿酒酵母W5最低抑菌浓度的测定 | 第47页 |
| 2.2.7 表达载体转化酿酒酵母W5及休哈塔假丝酵母20335 | 第47-48页 |
| 2.2.8 酿酒酵母W5及休哈塔假丝酵母20335转化子的筛选与鉴定 | 第48页 |
| 2.2.9 原生质体融合及融合子的检出 | 第48-49页 |
| 2.2.10 融合子质粒消除 | 第49页 |
| 2.2.11 双亲株及融合子木糖、葡萄糖单碳源发酵试验 | 第49-50页 |
| 2.2.12 双亲株及融合子木糖、葡萄糖混合碳源发酵试验 | 第50页 |
| 2.2.13 融合子发酵罐扩大培养发酵性能初探 | 第50-52页 |
| 第3章 结果与分析 | 第52-98页 |
| 3.1 ADHp、ADHt及Blasticidin抗性基因bsd的克隆与测序 | 第52-61页 |
| 3.1.1 ADHp的克隆与测 | 第52-55页 |
| 3.1.2 ADHt的克隆与测序 | 第55-58页 |
| 3.1.3 Blasticidin抗性基因bsd的克隆与测序 | 第58-61页 |
| 3.2 报告基因gusA的获得 | 第61-63页 |
| 3.2.1 质粒载体pBI121的获得 | 第61页 |
| 3.2.2 酶切获得gusA片段及胶回收纯化 | 第61-63页 |
| 3.3 酿酒酵母表达载体pZLY1的构建 | 第63-66页 |
| 3.3.1 pKT0150和pZLYT-ADHp的双酶切 | 第63页 |
| 3.3.2 重组质粒载体pZLY1阳性转化子的筛选与鉴定 | 第63-66页 |
| 3.4 酿酒酵母表达载体pZLY2的构建 | 第66-74页 |
| 3.4.1 载体pZLYA的构建 | 第66-68页 |
| 3.4.2 载体pZLYAB的构建 | 第68-71页 |
| 3.4.3 载体pZLY2的构建 | 第71-74页 |
| 3.5 G418对休哈塔假丝酵母20335最低抑菌浓度的测定 | 第74-75页 |
| 3.6 Blasticidin对酿酒酵母W5最低抑菌浓度的测定 | 第75页 |
| 3.7 酿酒酵母W5及休哈塔假丝酵母20335转化子筛选与鉴定 | 第75-79页 |
| 3.7.1 酿酒酵母W5转化子的筛选与鉴定 | 第75-77页 |
| 3.7.2 休哈塔假丝酵母20335转化子的筛选与鉴定 | 第77-79页 |
| 3.8 原生质体融合及融合子的检出与鉴定 | 第79-83页 |
| 3.8.1 原生质体融合子的检出 | 第79-80页 |
| 3.8.2 原生质体融合子的鉴定 | 第80-83页 |
| 3.9 融合子质粒消除 | 第83-84页 |
| 3.10 双亲株及融合子木糖、葡萄糖单碳源发酵试验 | 第84-89页 |
| 3.10.1 原生质体融合双亲株W5及20335单碳源发酵性能测定 | 第84-85页 |
| 3.10.2 原生质体融合子单碳源发酵性能测定 | 第85-89页 |
| 3.11 双亲株及融合子木糖、葡萄糖混合碳源发酵试验 | 第89-93页 |
| 3.11.1 原生质体融合双亲株W5及20335混合碳源发酵性能测定 | 第89-90页 |
| 3.11.2 原生质体融合子混合碳源发酵性能测定 | 第90-93页 |
| 3.12 融合子发酵罐扩大培养发酵性能初探 | 第93-97页 |
| 3.12.1 双亲株及融合子OD值和菌体干重关系曲线 | 第93-94页 |
| 3.12.2 双亲株及融合子发酵罐扩大培养试验 | 第94-97页 |
| 3.13 总结 | 第97-98页 |
| 第4章 讨论 | 第98-105页 |
| 4.1 酵母基因表达载体的种类及选择依据 | 第98-99页 |
| 4.2 可选用酵母菌筛选的报告基因种类 | 第99-101页 |
| 4.3 本试验原生质体融合子筛选方法与其他方法的比较 | 第101页 |
| 4.4 原生质体融合子的碳源利用及产醇 | 第101-103页 |
| 4.4.1 摇瓶水平原生质体融合子的碳源利用及产醇 | 第101-102页 |
| 4.4.2 发酵罐水平原生质体融合子的碳源利用及产醇 | 第102-103页 |
| 4.5 融合子特征进一步鉴定的方法 | 第103页 |
| 4.6 工作展望 | 第103-105页 |
| 第5章 结论 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-116页 |
| 附录1 | 第116-117页 |
| 附录2 | 第117-118页 |
| 附录3 | 第118-119页 |
| 附录4 | 第119-120页 |
| 附录5 | 第120-121页 |
| 附录6 | 第121-123页 |
| 附录7 | 第123-125页 |
| 附录8 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127-129页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第129-130页 |
