| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 英文缩略语 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-31页 |
| 1 糖尿病研究进展 | 第12-25页 |
| 1.1 糖尿病简介 | 第12页 |
| 1.2 症状 | 第12-13页 |
| 1.3 发病原因 | 第13页 |
| 1.4 糖尿病分类 | 第13-16页 |
| 1.4.1 Ⅰ型糖尿病(Type I diabetes,T1DM) | 第13-14页 |
| 1.4.2 Ⅱ型糖尿病(Type 2 diabetes,T2DM) | 第14-15页 |
| 1.4.3 妊娠型糖尿病(Gestational diabetes,GDM) | 第15-16页 |
| 1.4.4 继发性糖尿病 | 第16页 |
| 1.5 诊断标准 | 第16页 |
| 1.6 血糖控制机制 | 第16-17页 |
| 1.7 近年来Ⅱ型糖尿病药物筛选靶点及机制 | 第17-24页 |
| 1.7.1 二肽基肽酶为治疗靶点的研究机制 | 第17-20页 |
| 1.7.1.1 胰高血糖素样肽1 | 第18页 |
| 1.7.1.2 葡萄糖依赖性促胰岛素多肽 | 第18-19页 |
| 1.7.1.3 二肽基肽酶Ⅳ及其抑制剂 | 第19-20页 |
| 1.7.2 a-葡萄糖苷酶及其抑制剂 | 第20-22页 |
| 1.7.3 蛋白酷氨酸磷酸酶IB及其抑制剂 | 第22-24页 |
| 1.8 糖尿病并发症 | 第24-25页 |
| 2 新疆特色植物资源 | 第25-28页 |
| 2.1 玫瑰花 | 第25-26页 |
| 2.2 石榴花 | 第26页 |
| 2.3 黑加仑 | 第26-27页 |
| 2.4 骆驼刺 | 第27-28页 |
| 参考文献及书籍 | 第28-31页 |
| 第二部分 实验部分 | 第31-90页 |
| 第一章 体外DPPⅣ酶筛体系建立及其应用研究 | 第31-40页 |
| 摘要 | 第31-32页 |
| 1 实验材料 | 第32页 |
| 1.1 细胞及主要试剂 | 第32页 |
| 1.2 主要实验仪器 | 第32页 |
| 2. 实验方法 | 第32-35页 |
| 2.1 肽基肽酶酶筛体系建立 | 第32-34页 |
| 2.1.1 Caco-2细胞培养及DPPⅣ酶提取 | 第32-33页 |
| 2.1.2 DPPⅣ酶活测定方法 | 第33-34页 |
| 2.1.3 DPPⅣ活性测定及条件优化 | 第34页 |
| 2.2 DPPⅣ抑制剂的筛选 | 第34-35页 |
| 3 实验结果 | 第35-38页 |
| 3.1 DPP Ⅳ反应体系模型的建立 | 第35-37页 |
| 3.1.1 底物Gly-Pro-pNA对DPP Ⅳ酶活性的影响 | 第35页 |
| 3.1.2 温度对DPPIV酶活性的影响 | 第35-36页 |
| 3.1.3 作用时间对DPPⅣ酶活性的影响 | 第36页 |
| 3.1.4 DPP Ⅳ酶筛模型体系的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2 维药提取物对DPP Ⅳ活性的影响 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-40页 |
| 第二章 抑制α-葡萄糖苷酶活性药物的细胞水平筛选体系的建立 | 第40-62页 |
| 摘要 | 第40-41页 |
| 1 实验材料 | 第41-44页 |
| 1.1 细胞和菌株等 | 第41-42页 |
| 1.2 试验主要用溶液 | 第42-43页 |
| 1.2.1 分子实验用溶液 | 第42页 |
| 1.2.2 细胞实验用溶液 | 第42-43页 |
| 1.2.3 实验用主要试剂 | 第43页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第43-44页 |
| 2 实验方法 | 第44-52页 |
| 2.1 实验基本方法 | 第44-46页 |
| 2.1.1 质粒的提取 | 第44页 |
| 2.1.2 酶切鉴定pcDNA3-GAA质粒及回收目的片段GAA | 第44-45页 |
| 2.1.3 酶切pEGFP-c1质粒及片段回收 | 第45页 |
| 2.1.4 目的基因GAA与pEGFP-c1质粒连接并鉴定 | 第45-46页 |
| 2.1.5 大肠杆菌(E.Coli DH5α)感受态细胞的制备 | 第46页 |
| 2.1.6 细菌质粒的转化 | 第46页 |
| 2.2 细胞实验方法 | 第46-51页 |
| 2.2.1 细胞完全培养基的配制 | 第46-47页 |
| 2.2.2 贴壁细胞CHO-K1、Caco-2冻存及复苏 | 第47-48页 |
| 2.2.2.1 冻存 | 第47页 |
| 2.2.2.2 复苏 | 第47-48页 |
| 2.2.3 CHO-K1、Caco-2细胞传代及计数 | 第48页 |
| 2.2.4 脂质体介导的DNA转染 | 第48-49页 |
| 2.2.5 确定最佳转染比例及DNA转染细胞 | 第49页 |
| 2.2.6 确定筛选体系的模型细胞 | 第49页 |
| 2.2.7 确定最佳G418浓度 | 第49-50页 |
| 2.2.8 MTT法测定细胞存活率 | 第50页 |
| 2.2.9 稳定CHO-GAA-EGFP细胞的获得及培养 | 第50-51页 |
| 2.3 酶活法体外筛选GAA抑制剂 | 第51-52页 |
| 2.4 细胞法筛选抑制剂 | 第52页 |
| 3 实验结果 | 第52-59页 |
| 3.1 构建pEFGP-c1-GAA质粒 | 第52-53页 |
| 3.1.1 酶切目的基因 | 第52-53页 |
| 3.1.2 重组质粒 | 第53页 |
| 3.2 筛选CHO-GAA-EGFP克隆细胞 | 第53-57页 |
| 3.2.1 脂质体法转染最佳比例的确定 | 第53-54页 |
| 3.2.2 细胞筛选体系模型的建立 | 第54-57页 |
| 3.2.2.1 药物对细胞正常生长的影响 | 第54-56页 |
| 3.2.2.2 确定最佳细胞模型 | 第56-57页 |
| 3.3 G418最佳筛选浓度 | 第57页 |
| 3.4 克隆细胞株系的筛选 | 第57-58页 |
| 3.5 a-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选 | 第58-59页 |
| 3.6 利用细胞筛选模型筛选抑制剂 | 第59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-62页 |
| 第三章 具有抑制PTP1B活性的植物提取物及抑制信号通路机制的研究 | 第62-90页 |
| 摘要 | 第62-65页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第65-68页 |
| 1.1 实验细胞及菌株等 | 第65页 |
| 1.2 实验材料 | 第65页 |
| 1.3 实验用仪器 | 第65页 |
| 1.4 实验用试剂的配制 | 第65-68页 |
| 2 实验方法 | 第68-73页 |
| 2.1 葡萄糖消耗 | 第68页 |
| 2.2 PTP1B酶表达与纯化 | 第68-69页 |
| 2.3 体外酶活体系筛选PTP1B抑制剂 | 第69-70页 |
| 2.4 PTP1B抑制剂信号通路研究 | 第70页 |
| 2.5 L6细胞诱导培养及药物处理 | 第70页 |
| 2.6 蛋白提取及变性 | 第70-71页 |
| 2.7 Western Blot实验方法 | 第71-73页 |
| 3 实验结果 | 第73-87页 |
| 3.0 葡萄糖消耗实验 | 第73-74页 |
| 3.1 表达纯化得到PTP1B蛋白 | 第74-75页 |
| 3.2 体外酶筛PTP1B | 第75页 |
| 3.3 提取物对PTP1B的抑制作用 | 第75-87页 |
| 3.3.1 玫瑰花提取物对PTP1B信号通路的影响 | 第75-80页 |
| 3.3.2 黑加仑BF2对PTP1B信号通路的影响 | 第80-83页 |
| 3.3.3 石榴花提取物对PTP1B信号通路的影响 | 第83-87页 |
| 5 讨论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-90页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第90-91页 |
| 1 结论 | 第90页 |
| 2 展望 | 第90-91页 |
| 个人简历 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
