| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第9-36页 |
| 1.1 PEDV 的流行病学特征 | 第10页 |
| 1.2 PEDV 的分类学特征 | 第10-11页 |
| 1.3 PEDV 分子生物学特性 | 第11-13页 |
| 1.4. PEDV 蛋白的特征 | 第13-18页 |
| 1.4.1 复制酶蛋白聚合体 | 第13页 |
| 1.4.2 ORF3 蛋白 | 第13-14页 |
| 1.4.3 纤突蛋白 | 第14-16页 |
| 1.4.4 膜糖蛋白 | 第16页 |
| 1.4.5 小膜蛋白 | 第16-17页 |
| 1.4.6 核衣壳蛋白 | 第17-18页 |
| 1.5 冠状病毒的增殖过程 | 第18-23页 |
| 1.5.1 病毒颗粒与受体结合与侵染 | 第18-20页 |
| 1.5.2 基因组的复制及病毒蛋白的合成 | 第20-21页 |
| 1.5.3 病毒颗粒的装配与释放 | 第21-23页 |
| 1.6 PEDV 的实验室诊断方法 | 第23-26页 |
| 1.6.1 免疫电镜法 | 第23页 |
| 1.6.2 免疫荧光法 | 第23页 |
| 1.6.3 ELISE 法 | 第23-24页 |
| 1.6.4 RT-PCR 法 | 第24-25页 |
| 1.6.5 RT-LAMP 法 | 第25页 |
| 1.6.6 免疫胶体金层析法 | 第25-26页 |
| 1.6.7 原位杂交技术 | 第26页 |
| 1.7 PEDV 疫苗研究进展 | 第26-29页 |
| 1.7.1 PEDV 灭活苗 | 第26-27页 |
| 1.7.2 PEDV 弱毒苗 | 第27-28页 |
| 1.7.3 转基因植物疫苗 | 第28页 |
| 1.7.4 乳酸杆菌疫苗 | 第28-29页 |
| 1.7.5 亚单位疫苗 | 第29页 |
| 1.8 病毒调控宿主细胞周期的研究进展 | 第29-34页 |
| 1.8.1 细胞周期及其调控分子 | 第30-31页 |
| 1.8.2 DNA 损伤信号通路 | 第31-32页 |
| 1.8.3 不同病毒对周期监测点的影响方式 | 第32-33页 |
| 1.8.4 冠状病毒调控细胞周期研究 | 第33-34页 |
| 1.9. 本实验研究的意义 | 第34-36页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第36-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 2.1.1 细胞与病毒 | 第36页 |
| 2.1.2 抗体 | 第36页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第36-37页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-53页 |
| 2.2.1 细胞及病毒的培养 | 第37-38页 |
| 2.2.2 引物及探针的合成 | 第38页 |
| 2.2.3 总 RNA 的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.4 总 cDNA 的反转录 | 第39页 |
| 2.2.5 阳性质粒的制备 | 第39-43页 |
| 2.2.6 荧光定量 PCR 反应条件的建立及优化 | 第43页 |
| 2.2.7 标准曲线的建立 | 第43-44页 |
| 2.2.8 敏感性实验 | 第44-45页 |
| 2.2.9 特异性实验 | 第45页 |
| 2.2.10 重复性实验 | 第45页 |
| 2.2.11 临床样品检测 | 第45页 |
| 2.2.12 PEDV 株在 VERO 细胞中增殖曲线的测定 | 第45-47页 |
| 2.2.13 PEDV 感染对细胞周期的影响 | 第47-51页 |
| 2.2.14 DNA 损伤通路与 PEDV 的感染的关系 | 第51-53页 |
| 第三章 实验结果 | 第53-69页 |
| 3.1 TAQ MAN-MGB 荧光定量 PCR 方法的建立与应用 | 第53-58页 |
| 3.1.1 阳性质粒的构建及反应条件的优化 | 第53-54页 |
| 3.1.2 标准曲线的建立 | 第54-55页 |
| 3.1.3 敏感性实验结果 | 第55-56页 |
| 3.1.4 特异性实验结果 | 第56-57页 |
| 3.1.5 重复性实验结果 | 第57页 |
| 3.1.6 临床样品检测 | 第57-58页 |
| 3.2 PEDV 在 VERO 细胞中的增殖曲线 | 第58-61页 |
| 3.3 PEDV 可引起 VERO 细胞产生 G1/G0 阻滞 | 第61-65页 |
| 3.3.1 流式细胞技术检测 VERO 细胞周期变化 | 第61-64页 |
| 3.3.2 Western Blot 检测主要周期蛋白的变化 | 第64-65页 |
| 3.4 细胞周期阻滞与 PEDV 增殖依赖于 DNA 损伤通路被激活 | 第65-69页 |
| 3.4.1 PEDV 的感染可激活 VERO 细胞的 DNA 损伤通路 | 第65-66页 |
| 3.4.2 抑制 DNA 损伤信号通可影响 PEDV 增殖及细胞周期阻滞 | 第66-69页 |
| 第四章 讨论 | 第69-74页 |
| 4.1 TAQ MAN-MGB 荧光定量 PCR 方法的建立与应用 | 第69-70页 |
| 4.2 PEDV 增殖、VERO 细胞周期阻滞及 DNA 损伤通路关系的分析 | 第70-74页 |
| 第五章 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 附录 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 本人攻读硕士期间发表的论文目录 | 第84-86页 |
