| 目录 | 第3-6页 |
| 图表目录 | 第6-8页 |
| 第一部分 过表达RICTOR基因腺病毒构建 | 第8-49页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 英文缩略语表 | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-15页 |
| 研究背景 | 第12-13页 |
| 研究内容 | 第13-15页 |
| 实验材料 | 第15-22页 |
| 一、菌株及质粒载体 | 第15-16页 |
| 二、细胞素及培养基 | 第16页 |
| 三、工具酶 | 第16页 |
| 四、仪器 | 第16-18页 |
| 五、主要试剂 | 第18-19页 |
| 六、主要试剂配制和成分 | 第19-22页 |
| 实验方法 | 第22-41页 |
| 一、扩增pAdTrack-CMV小片段 | 第22页 |
| 二、乙醇沉淀回收PCR产物 | 第22-23页 |
| 三、酶切pAdTrack-CMV载体质粒和回收PCR产物 | 第23页 |
| 四、酶切产物电泳 | 第23-24页 |
| 五、从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA片段 | 第24页 |
| 六、连接反应 | 第24-25页 |
| 七、感受态细菌DH5α的制备 | 第25页 |
| 八、连接产物转化、扩增 | 第25页 |
| 九、质粒小量提取 | 第25-26页 |
| 十、Smil酶切鉴定 | 第26页 |
| 十一、重组穿梭载体pAdTrack-rictor的构建 | 第26-28页 |
| 十二、BJ5183感受态的制备(含AdEasy) | 第28-29页 |
| 十三、Pmel线性化pAdTrack-rictor和pAdTrack-CMV | 第29-30页 |
| 十四、电转 | 第30页 |
| 十五、Smil酶切鉴定重组质粒 | 第30页 |
| 十六、重组腺病毒Ad-rictor和Ad-GFP的获得及纯化 | 第30-32页 |
| 十七、重组腺病毒Ad-Rictor和Ad-GFP的鉴定 | 第32-34页 |
| 十八、病毒滴度的测定及转染效率的检测 | 第34页 |
| 十九、检测转染Eahy926细胞后rictor基因mRNA的表达 | 第34-36页 |
| 总RNA提取 | 第34-35页 |
| 逆转录合成cDNA | 第35页 |
| Realtime PCR检测rictor基因mRNA水平表达 | 第35-36页 |
| 二十、免疫印迹法检测病毒转染Eahy926细胞后Rictor蛋白的表达 | 第36-41页 |
| 实验分组及蛋白质收集 | 第36-37页 |
| 蛋白浓度测定 | 第37-38页 |
| 总蛋白变性 | 第38页 |
| SDS-PAGE电泳 | 第38-39页 |
| 转膜 | 第39页 |
| 封闭 | 第39页 |
| 一抗孵育 | 第39页 |
| 孵育二抗 | 第39-40页 |
| 显色 | 第40-41页 |
| 实验结果 | 第41-48页 |
| 一、pAdTrack-CMV的改造 | 第41页 |
| 二、重组穿梭载体pAdTrack-rictor的构建 | 第41-42页 |
| 三、重组病毒质粒pAd-rictor的构建 | 第42-43页 |
| 四、重组腺病毒Ad-rictor的获得 | 第43-44页 |
| 五、重组腺病毒Ad-rictor的鉴定 | 第44页 |
| 六、滴度的测定 | 第44页 |
| 七、病毒感染效率测定 | 第44-46页 |
| 八、Real-time PCR检测rictor基因mRNA水平表达 | 第46页 |
| 九、Western Blot检测rictor基因蛋白水平的表达 | 第46-48页 |
| 讨论 | 第48-49页 |
| 第二部分 TOLL样受体2在血管紧张素Ⅱ致高血压小鼠心脏纤维化中的作用 | 第49-65页 |
| 摘要 | 第49页 |
| ABSTRACT | 第49-51页 |
| 英文缩略语表 | 第51-52页 |
| 引言 | 第52-53页 |
| 实验材料 | 第53-56页 |
| 一、实验动物 | 第53页 |
| 二、实验仪器 | 第53-54页 |
| 三、实验试剂 | 第54页 |
| 四、主要试剂配制和成分 | 第54-56页 |
| 实验方法 | 第56-59页 |
| 一、实验动物分组 | 第56页 |
| 二、小鼠高血压模型的建立 | 第56页 |
| 三、组织取材和切片制备 | 第56-57页 |
| 四、石蜡切片制备 | 第57页 |
| 五、Masson梁色观察心脏纤维化 | 第57页 |
| 六、Masson染色结果分析 | 第57-58页 |
| 七、心肌免疫组化染色 | 第58-59页 |
| 八、图像采集与分析 | 第59页 |
| 实验结果 | 第59-62页 |
| 一、高血压模型建立 | 第59页 |
| 二、各组心肌纤维比较 | 第59-60页 |
| 三、各组Ⅰ型胶原蛋白比较 | 第60-61页 |
| 四、各组转化生长因子β比较 | 第61-62页 |
| 讨论 | 第62-65页 |
| 一、血管紧张素II诱发高血压 | 第62页 |
| 二、血管紧张素II在心肌纤维化中的作用 | 第62-63页 |
| 三、Toll样受体启动免疫反应 | 第63页 |
| 四、TLR2与心肌纤维化 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 个人简历 | 第69-70页 |
