| 摘要 | 第3-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 缩略词表 | 第21-23页 |
| 第一章 前言 | 第23-41页 |
| 1.1 蓝藻水华和蓝藻毒素 | 第23-28页 |
| 1.1.1 蓝藻水华 | 第23-24页 |
| 1.1.2 蓝藻毒素 | 第24-28页 |
| 1.2 微囊藻毒素（microcystins，MCs） | 第28-31页 |
| 1.3 MCs肝毒性及其机理 | 第31-34页 |
| 1.3.1 MCs肝毒性 | 第31-33页 |
| 1.3.2 MCs肝毒性作用机理 | 第33-34页 |
| 1.4 MCs的细胞毒性及其机理 | 第34-37页 |
| 1.4.1 MCs对原代细胞和肿瘤细胞的毒性 | 第34-35页 |
| 1.4.2 MCs促进细胞增殖的机理 | 第35-36页 |
| 1.4.3 MCs诱导细胞凋亡的机理 | 第36-37页 |
| 1.5 HepG2细胞 | 第37-40页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第40-41页 |
| 第二章 微囊藻毒素对HepG2细胞的毒性作用 | 第41-61页 |
| 2.1 材料和方法 | 第41-46页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第41页 |
| 2.1.2 微囊藻毒素-LR | 第41页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第41-43页 |
| 2.1.4 主要实验试剂 | 第43页 |
| 2.1.5 细胞培养 | 第43页 |
| 2.1.6 MC-LR染毒 | 第43-44页 |
| 2.1.7 细胞活力检测 | 第44页 |
| 2.1.8 细胞周期检测 | 第44页 |
| 2.1.9 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第44-45页 |
| 2.1.10 细胞形态观察 | 第45页 |
| 2.1.11 细胞核形态观察 | 第45页 |
| 2.1.12 溶酶体观察 | 第45页 |
| 2.1.13 线粒体观察 | 第45页 |
| 2.1.14 数据处理和统计学分析 | 第45-46页 |
| 2.2 结果 | 第46-57页 |
| 2.2.1 MC-LR暴露对HepG2细胞活力的影响 | 第46-47页 |
| 2.2.2 MC-LR暴露对HepG2细胞周期的影响 | 第47-49页 |
| 2.2.3 流式细胞仪检测MC-LR暴露对HepG2细胞凋亡的影响 | 第49-50页 |
| 2.2.4 MC-LR暴露对HepG2细胞形态的影响 | 第50-52页 |
| 2.2.5 MC-LR暴露对HepG2细胞核的影响 | 第52-53页 |
| 2.2.6 MC-LR暴露对HepG2细胞溶酶体的影响 | 第53-55页 |
| 2.2.7 MC-LR暴露对HepG2细胞线粒体的影响 | 第55-57页 |
| 2.3 讨论 | 第57-59页 |
| 2.4. 小结和结论 | 第59-61页 |
| 第三章 MC-LR对HepG2细胞代谢及其耐药基因表达的影响 | 第61-99页 |
| 3.1 材料和方法 | 第62-72页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第62页 |
| 3.1.2 MC-LR | 第62页 |
| 3.1.3 主要实验试剂 | 第62-65页 |
| 3.1.4 细胞培养 | 第65页 |
| 3.1.5 MC-LR染毒 | 第65页 |
| 3.1.6 细胞活力检测 | 第65页 |
| 3.1.7 荧光定量PCR（qPCR） | 第65-69页 |
| 3.1.8 蛋白印迹法（Western blot） | 第69-70页 |
| 3.1.9 细胞核形态检测 | 第70页 |
| 3.1.10 线粒体膜电位检测 | 第70页 |
| 3.1.11 细胞内ROS水平检测 | 第70-71页 |
| 3.1.12 细胞内丙二醛（MDA）水平检测 | 第71页 |
| 3.1.13 Caspase-3 水平检测 | 第71页 |
| 3.1.14 数据处理和统计学分析 | 第71-72页 |
| 3.2 结果 | 第72-90页 |
| 3.2.1 MC-LR可进入HepG2细胞 | 第72-73页 |
| 3.2.2 MC-LR暴露对HepG2细胞I相解毒酶基因表达的影响 | 第73-77页 |
| 3.2.3 CYPs诱导剂处理对MC-LR暴露引起HepG2细胞毒性和细胞损伤的影响 | 第77-80页 |
| 3.2.4 CYP2E1抑制剂CMZ处理对MC-LR暴露引起HepG2细胞毒性和细胞损伤的影响 | 第80-84页 |
| 3.2.5 MC-LR暴露对HepG2细胞II相解毒酶基因表达的影响 | 第84-86页 |
| 3.2.6 MC-LR暴露对HepG2细胞ABC转运蛋白基因表达的影响 | 第86-88页 |
| 3.2.7 MC-LR暴露对HepG2细胞AhR、CAR和PXR基因表达的影响 | 第88-90页 |
| 3.3 讨论 | 第90-97页 |
| 3.3.1 HepG2细胞可主动吸收MC-LR | 第90页 |
| 3.3.2 HepG2细胞I相解毒酶对MC-LR毒性的响应及其与MC-LR解毒的关系 | 第90-94页 |
| 3.3.3 HepG2细胞II相解毒酶对MC-LR毒性的响应及其与MC-LR解毒的关系 | 第94-95页 |
| 3.3.4 MC-LR暴露对HepG2细胞ABC转运蛋白基因表达的影响 | 第95-96页 |
| 3.3.5 HepG2细胞AhR、CAR和PXR对MC-LR毒性的响应 | 第96-97页 |
| 3.4 小结和结论 | 第97-99页 |
| 第四章 MC-LR低浓度长期暴露对HepG2细胞的影响 | 第99-117页 |
| 4.1 材料方法 | 第99-103页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第99页 |
| 4.1.2 MC-LR | 第99页 |
| 4.1.3 主要实验试剂 | 第99-100页 |
| 4.1.4 不同浓度FBS培养基培养HepG2细胞 | 第100页 |
| 4.1.5 细胞培养及MC-LR染毒 | 第100页 |
| 4.1.6 细胞活力检测 | 第100-101页 |
| 4.1.7 Western blot | 第101页 |
| 4.1.8 细胞抗氧化系统的检测 | 第101页 |
| 4.1.9 基因表达检测 | 第101-102页 |
| 4.1.10 ELISA法检测蛋白含量 | 第102页 |
| 4.1.11 数据处理和统计学分析 | 第102-103页 |
| 4.2 结果 | 第103-111页 |
| 4.2.1 培养基FBS含量对HepG2细胞活力的影响 | 第103页 |
| 4.2.2 MC-LR低浓度长时间暴露对HepG2细胞活力的影响 | 第103-104页 |
| 4.2.3 MC-LR低浓度长时间暴露可进入HepG2细胞 | 第104-105页 |
| 4.2.4 MC-LR长时间暴露对HepG2细胞ROS含量的影响 | 第105页 |
| 4.2.5 MC-LR长时间暴露对HepG2细胞SOD和MDA的影响 | 第105-106页 |
| 4.2.6 MC-LR暴露HepG2细胞 48 h对细胞NF-κB p65、TNF-α、IL-1β 和IL-6表达的影响 | 第106-109页 |
| 4.2.7 MC-LR长期暴露对HepG2细胞NF-κB p65、TNF-α、IL-1β 和IL-6 表达的影响 | 第109-111页 |
| 4.3 讨论 | 第111-115页 |
| 4.3.1 培养基FBS含量对HepG2细胞活力的影响 | 第111页 |
| 4.3.2 MC-LR低浓度长时间暴露对HepG2细胞活力的影响 | 第111页 |
| 4.3.3 MC-LR低浓度长时间暴露对HepG2细胞氧化应激系统的影响 | 第111-112页 |
| 4.3.4 MC-LR低浓度长时间暴露对HepG2细胞炎性相关因子表达的影响 | 第112-115页 |
| 4.4 小结和结论 | 第115-117页 |
| 第五章 高浓度MC-LR处理致HepG2细胞凋亡及其机理 | 第117-151页 |
| 5.1 材料方法 | 第117-122页 |
| 5.1.1 细胞株 | 第117页 |
| 5.1.2 MC-LR | 第117页 |
| 5.1.3 主要实验试剂 | 第117-119页 |
| 5.1.4 细胞培养及MC-LR染毒 | 第119页 |
| 5.1.5 细胞抗氧化系统的检测 | 第119页 |
| 5.1.6 细胞凋亡相关基因、原癌/抑癌基因表达检测 | 第119-120页 |
| 5.1.7 Western blot | 第120-121页 |
| 5.1.8 Caspase-3/-8/-9 蛋白含量检测 | 第121页 |
| 5.1.9 数据处理和统计学分析 | 第121-122页 |
| 5.2 结果 | 第122-145页 |
| 5.2.1 高浓度MC-LR暴露对HepG2细胞ROS含量的影响 | 第122页 |
| 5.2.2 MC-LR暴露对HepG2细胞热休克蛋白含量的影响 | 第122-124页 |
| 5.2.3 MC-LR暴露对HepG2细胞抗氧化系统的影响 | 第124-126页 |
| 5.2.4 MC-LR暴露对HepG2细胞COX-2、Cyt-c和Smac/Diablo的影响 | 第126-129页 |
| 5.2.5 MC-LR暴露对HepG2细胞p53、p21/WAF1、Fas和FasL表达的影响 | 第129-132页 |
| 5.2.6 MC-LR暴露对HepG2细胞Bad、Cleaved-Bid、Bcl-2 和Bax蛋白水平的影响 | 第132-135页 |
| 5.2.7 MC-LR暴露对HepG2细胞PUMA和survivin蛋白水平的影响 | 第135-137页 |
| 5.2.8 MC-LR暴露对HepG2细胞Caspase-3、Caspase-8 和Caspase-9 表达的影响 | 第137-140页 |
| 5.2.9 MC-LR暴露对HepG2细胞即刻早期基因c-fos、c-jun和c-myc表达的影响 | 第140-145页 |
| 5.3 讨论 | 第145-150页 |
| 5.3.1 高浓度MC-LR暴露导致HepG2细胞产生过量的ROS并引起细胞氧化应激是其引发细胞凋亡的重要生化机制 | 第145-146页 |
| 5.3.2 凋亡相关基因对MC-LR致细胞凋亡的响应及其作用 | 第146-148页 |
| 5.3.3 即刻早期基因/原癌基因对MC-LR致细胞凋亡的响应及其作用 | 第148-150页 |
| 5.4 小结和结论 | 第150-151页 |
| 第六章 MC-LR肝细胞毒性的转录组学分析 | 第151-189页 |
| 6.1 材料方法 | 第151-159页 |
| 6.1.1 细胞株 | 第151页 |
| 6.1.2 MC-LR | 第151页 |
| 6.1.3 主要实验试剂 | 第151-152页 |
| 6.1.4 MC-LR染毒 | 第152页 |
| 6.1.5 总RNA提取及质量检测 | 第152页 |
| 6.1.6 RNA-seq测序及生物信息学分析 | 第152-156页 |
| 6.1.7 qPCR验证差异表达的基因 | 第156-158页 |
| 6.1.8 数据处理和统计学分析 | 第158-159页 |
| 6.2 结果 | 第159-185页 |
| 6.2.1 RNA抽提及质量检测 | 第159页 |
| 6.2.2 测序质量评估 | 第159-162页 |
| 6.2.3 HepG2细胞转录组与人基因和基因组比对情况 | 第162页 |
| 6.2.4 基因覆盖度统计 | 第162-163页 |
| 6.2.5 MC-LR处理组与对照组HepG2细胞差异表达基因分析 | 第163-167页 |
| 6.2.6 MC-LR处理组与对照组HepG2细胞差异表达基因GO分析 | 第167-176页 |
| 6.2.7 KEGG pathway分析 | 第176-184页 |
| 6.2.8 qPCR验证转录组差异表达基因 | 第184-185页 |
| 6.3 讨论 | 第185-188页 |
| 6.4 小结和结论 | 第188-189页 |
| 第七章 MC-LR处理对HepG2细胞miRNA表达谱的影响 | 第189-229页 |
| 7.1 材料方法 | 第190-199页 |
| 7.1.1 细胞株 | 第190页 |
| 7.1.2 MC-LR | 第190页 |
| 7.1.3 主要实验试剂 | 第190页 |
| 7.1.4 MC-LR染毒 | 第190页 |
| 7.1.5 总RNA提取及质量检测 | 第190页 |
| 7.1.6 miRNA高通量测序及生物信息学分析 | 第190-194页 |
| 7.1.7 新mi RNA预测及分析 | 第194页 |
| 7.1.8 qPCR验证差异表达的miRNA | 第194-198页 |
| 7.1.9 MC-LR暴露对HepG2细胞目标miRNA表达的影响 | 第198页 |
| 7.1.10 数据处理和统计学分析 | 第198-199页 |
| 7.2 结果 | 第199-226页 |
| 7.2.1 RNA抽提及质量检测 | 第199页 |
| 7.2.2 测序质量评估、数据质量及长度分布分析 | 第199-201页 |
| 7.2.3 标准信息分析结果 | 第201-218页 |
| 7.2.4 新mi RNA预测分析 | 第218-222页 |
| 7.2.5 qPCR验证miRNA表达谱分析结果 | 第222-223页 |
| 7.2.6 MC-LR暴露对HepG2细胞部分目标miRNA表达的影响 | 第223-226页 |
| 7.3 讨论 | 第226-228页 |
| 7.4 小结和结论 | 第228-229页 |
| 第八章 总结与展望 | 第229-233页 |
| 8.1 主要研究结论 | 第229-230页 |
| 8.2 论文创新点 | 第230-231页 |
| 8.3 展望 | 第231-233页 |
| 参考文献 | 第233-267页 |
| 致谢 | 第267-269页 |
| 攻读学位期间学术成果 | 第269-272页 |
