| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 前言 | 第7-14页 |
| 实验材料和方法 | 第14-31页 |
| 一.实验材料 | 第14-16页 |
| 1. 主要仪器 | 第14-15页 |
| 2. 主要试剂 | 第15页 |
| 3. 菌毒株,载体质粒,细胞和实验动物 | 第15-16页 |
| 二.实验方法 | 第16-31页 |
| 1. 构建pETP6重组质粒并鉴定 | 第16-20页 |
| 2. pETP6v载体质粒的构建及鉴定 | 第20-23页 |
| 3. 携带6个外源抗原表位插入酶切位点的pETP6v载体质粒的构建 | 第23-24页 |
| 4. 携带PV2抗原表位重组表达质粒pETP6F308X/PV_2N_1的构建及鉴定 | 第24-26页 |
| 5. 重组VP6F载体蛋白和重组嵌合蛋白6F/PV2N1在大肠杆菌的表达 | 第26页 |
| 6. 重组载体蛋白(rVP6F)和重组嵌合蛋白6F/PV2N1的纯化 | 第26-27页 |
| 7. Bradford法测定纯化蛋白的浓度 | 第27-28页 |
| 8. MA104/Vero细胞复苏与传代培养 | 第28页 |
| 9. RV/PV增殖 | 第28页 |
| 10. RV/PV的纯化 | 第28-29页 |
| 11. 动物免疫及血清抗体的制备 | 第29页 |
| 12. 微量滴定法测SA11/PV病毒感染性滴度 | 第29-30页 |
| 13. Western blot检测重组嵌合蛋白的免疫原性 | 第30页 |
| 14. 免疫荧光试验 | 第30页 |
| 15. 重组VP6F载体蛋白和重组嵌合蛋白6F/PV_2N_1免疫豚鼠血清中和抗体效价的检测 | 第30-31页 |
| 结果与分析 | 第31-38页 |
| 1 质粒的构建 | 第31-33页 |
| 2 重组嵌合蛋白6F/PV2N1在BL21(DE3)中的表达 | 第33页 |
| 3 重组嵌合蛋白6F/PV2N1的纯化 | 第33-34页 |
| 4 纯化蛋白浓度的测定 | 第34-35页 |
| 5 Western blot分析 | 第35-37页 |
| 6 免疫荧光 | 第37页 |
| 7 RV/PV病毒感染性滴度的测定 | 第37-38页 |
| 8 免疫动物血清中和抗体滴度测定 | 第38页 |
| 讨论 | 第38-42页 |
| 小结 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 附录 | 第48-67页 |
| (一) 缩略词 | 第48-49页 |
| (二) 主要溶液配方 | 第49-57页 |
| (三) 主要实验步骤 | 第57-65页 |
| (四) RVTB-CHEN株VP6编码基因核苷酸序列及氨基酸序列 | 第65-66页 |
| (五）RVTB-Chen株VPGv载体基因核苷酸序列（1,143bp) | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 研究生简历 | 第68-70页 |
