| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 前言 | 第13-31页 |
| 1 海水养殖动物细菌性病害的研究概况 | 第13-16页 |
| ·海水养殖概况 | 第13-14页 |
| ·海水养殖细菌性病害 | 第14-16页 |
| 2 病原弧菌的毒力因子 | 第16-27页 |
| ·黏附因子(Adhesions) | 第17页 |
| ·铁吸收系统(Iron uptake system) | 第17-18页 |
| ·荚膜(Capsule) | 第18页 |
| ·外膜蛋白(Outer membrane protein,OMP) | 第18-19页 |
| ·胞外蛋白酶(Extracellular protease) | 第19页 |
| ·脂多糖(LiPopolysaccharide,LPS) | 第19-20页 |
| ·磷脂酶(Phospholipase) | 第20-22页 |
| ·溶血素(Hemolysin) | 第22-27页 |
| ·副溶血弧菌的耐热直接溶血素(TDH)及其相关溶血素 | 第24-25页 |
| ·霍乱弧菌的El Tor溶血素(HlyA)及其相关溶血素 | 第25-26页 |
| ·副溶血弧菌的热不稳定性溶血素(TLH)及其相关溶血素 | 第26-27页 |
| ·副溶血弧菌的热稳定性溶血素(δ-VPH)及其相关溶血素 | 第27页 |
| ·霍乱弧菌01的一种溶血素(HLX)及其相关溶血素 | 第27页 |
| 3 坎氏弧菌的研究概况 | 第27-29页 |
| 4 本论文的研究目的和意义 | 第29-31页 |
| 1 材料与方法 | 第31-46页 |
| ·菌株与质粒 | 第31-32页 |
| ·实验动物 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第33页 |
| ·TLH溶血素基因的克隆及表达载体的构建 | 第33-38页 |
| ·坎氏弧菌VIB 285基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·引物设计及合成 | 第34页 |
| ·表达载体pET26b(+)质粒DNA提取 | 第34-35页 |
| ·坎氏弧菌VIB 285溶血素基因tlh的PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·pET-26b(+)/tlh表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌JM109和BL21(DE3)的感受态细胞制备 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的转化 | 第38页 |
| ·重组质粒pET-26b(+)/tlh的鉴定 | 第38页 |
| ·TLH溶血素在大肠杆菌BL21(DE3)中的诱导表达 | 第38-40页 |
| ·TLH溶血素在大肠杆菌BL21(DE3)中的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·坎氏弧菌TLH溶血素的SDS-PAGE检测 | 第39-40页 |
| ·诱导表达重组菌的溶血活性检测 | 第40页 |
| ·诱导表达重组菌的磷脂酶活性检测 | 第40页 |
| ·TLH溶血素表达及纯化 | 第40-43页 |
| ·重组菌BL21(DE3)/pET-26b(+)/tlh的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·从菌体中纯化TLH溶血素 | 第41页 |
| ·Ni琼脂糖亲和柱亲和层析 | 第41页 |
| ·Ni琼脂糖亲和层析柱的处理与再生 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE检测纯化后的溶血素 | 第42页 |
| ·蛋白质含量侧定 | 第42-43页 |
| ·TLH溶血素的活性研究 | 第43-45页 |
| ·TLH溶血素的溶血活性检测 | 第43页 |
| ·TLH溶血素的磷脂酶活性检测 | 第43页 |
| ·TLH溶血素的溶血活力测定 | 第43-44页 |
| ·温度对TLH溶血素溶血活力的影响 | 第44页 |
| ·pH对TLH溶血素溶血活力的影响 | 第44页 |
| ·金属离子对TLH溶血素溶血活力的影响 | 第44-45页 |
| ·TLH溶血素对斑马鱼的致病性 | 第45-46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-56页 |
| ·pET-26b(+)/tlh表达载体的构建及鉴定 | 第46-47页 |
| ·坎氏弧菌VIB 285溶血素基因tlh的PCR扩增 | 第46页 |
| ·pET-26b(+)/tlh表达载体的构建及鉴定 | 第46-47页 |
| ·坎氏弧菌TLH溶血素的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·重组菌的溶血活性检测 | 第47-48页 |
| ·重组菌的磷脂酶活性检测 | 第48页 |
| ·坎氏弧菌TLH溶血素的表达及纯化 | 第48-50页 |
| ·坎氏弧菌TLH溶血素纯化 | 第48-49页 |
| ·纯化的坎氏弧菌TLH溶血素蛋白质含量的测定 | 第49-50页 |
| ·坎氏弧菌TLH溶血素的活性研究 | 第50-54页 |
| ·坎氏弧菌TLH溶血素的溶血活性测定 | 第50-51页 |
| ·坎氏弧菌TLH溶血素的磷脂酶活性测定 | 第51页 |
| ·温度对坎氏弧菌TLH溶血素溶血活力的影响 | 第51-52页 |
| ·pH对坎氏弧菌TLH溶血素溶血活力的影响 | 第52-53页 |
| ·金属离子对坎氏弧菌TLH溶血素溶血活力的影响 | 第53-54页 |
| ·TLH溶血素对斑马鱼的致病性 | 第54-56页 |
| 3 讨论 | 第56-59页 |
| 4 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-74页 |
| 附录Ⅰ V.campbellii VIB285全序列 | 第74-75页 |
| 附录Ⅱ 溶液配方 | 第75-77页 |
| 附录Ⅲ 攻读硕士学位期间发表的文章 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
