摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-6页 |
1 引言和文献综述 | 第10-21页 |
1.1 心肌肥大的研究 | 第10-11页 |
1.2 心肌肥大的分类 | 第11-12页 |
1.3 遗传学上对于心肌肥大和心衰的研究 | 第12-13页 |
1.4 心肌肥大和心衰发生的分子机制 | 第13-14页 |
1.5 TGF-β信号途径与心肌肥大的关系 | 第14-17页 |
1.6 SMAD分子和心肌肥大的关系 | 第17-18页 |
1.7 腺病毒的相关研究 | 第18-19页 |
1.8 HZFHG5a基因的研究进展及本文研究意义 | 第19-21页 |
2 材料和方法 | 第21-34页 |
2.1 材料 | 第21-23页 |
2.1.1 生物信息学软件 | 第21页 |
2.1.2 菌株和质粒 | 第21-22页 |
2.1.3 细胞 | 第22页 |
2.1.4 器材 | 第22-23页 |
2.2 方法 | 第23-34页 |
2.2.1 腺病毒的扩增 | 第23-24页 |
2.2.2 大鼠原代心肌细胞的分离 | 第24-25页 |
2.2.3 腺病毒转染原代心肌细胞 | 第25页 |
2.2.4 体外刺激心脏细胞肥大模型 | 第25-26页 |
2.2.5 细胞中总RNA的提取 | 第26-27页 |
2.2.6 RNA逆转录 | 第27页 |
2.2.7 PCR引物设计与合成 | 第27-28页 |
2.2.8 RT-PCR与琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
2.2.9 细胞蛋白的提取 | 第28页 |
2.2.10 SDS-PAGE凝胶配制 | 第28-29页 |
2.2.11 Western blot免疫印记 | 第29-30页 |
2.2.12 培养细胞的免疫荧光标记方法 | 第30页 |
2.2.13 无内毒素试剂盒提取质粒 | 第30-31页 |
2.2.14 细胞的培养和转染 | 第31页 |
2.2.15 荧光素酶报告基因活性分析实验(Luciferase) | 第31-32页 |
2.2.16 LacZ报告基因检测 | 第32页 |
2.2.17 酶切产物的纯化回收 | 第32页 |
2.2.18 酶切产物与载体的连接 | 第32-33页 |
2.2.19 转化(热休克法) | 第33-34页 |
3 实验结果及其分析 | 第34-43页 |
3.1.扩增Ad HZFHG5a腺病毒载体转染 293A细胞 | 第34-35页 |
3.2 分离原代大鼠心肌细胞 | 第35-36页 |
3.3 腺病毒转染新生大鼠原代心肌细胞 | 第36页 |
3.4 RT-PCR分析HZFHG5a基因对于病理性肥大的影响 | 第36-38页 |
3.5 Western-bolt分析HZFHG5a基因对于ANF的影响 | 第38页 |
3.6 HZFHG5a过表达增大心肌细胞表面积 | 第38-39页 |
3.7 HZFHG5a对SMAD4入核的影响 | 第39-40页 |
3.8 HZFHG5a对ANF-luc、β-MHC-luc、CAGA-luc、NFAT-luc转录活性分析 | 第40-43页 |
4 讨论 | 第43-45页 |
5 结语 | 第45-46页 |
参考文献 | 第46-51页 |
附录一 | 第51-52页 |
致谢 | 第52-53页 |