| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 主要英文缩写词 | 第7-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 登革热的流行病学及其疫苗研究现状 | 第12-14页 |
| 1.2 抗体依赖的感染增强效应 | 第14-15页 |
| 1.3 登革病毒基因组及其胞内复制 | 第15-16页 |
| 1.4 DENVNS5的结构和功能 | 第16-20页 |
| 1.4.1 甲基转移酶活性 | 第17-18页 |
| 1.4.2 接头残基 | 第18页 |
| 1.4.3 RNA依赖的RNA聚合酶活性 | 第18-20页 |
| 1.5 登革热的诊断治疗 | 第20-21页 |
| 1.6 研究内容 | 第21-24页 |
| 第2章 登革病毒NS5C端70kDa片段的重组表达 | 第24-48页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第24-29页 |
| 2.1.1 细胞株与载体 | 第24页 |
| 2.1.2 工具酶 | 第24页 |
| 2.1.3 试剂和耗材 | 第24-25页 |
| 2.1.4 抗体 | 第25页 |
| 2.1.5 引物 | 第25页 |
| 2.1.6 主要溶液配制 | 第25-28页 |
| 2.1.7 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-42页 |
| 2.2.1 表达质粒的构建策略 | 第29页 |
| 2.2.2 pQE30线性载体的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.3 DENV-2NS5基因的克隆 | 第30-35页 |
| 2.2.4 目的基因NS5的粘端化 | 第35页 |
| 2.2.5 pQE30载体与目的基因NS5的连接反应 | 第35页 |
| 2.2.6 连接产物转化与重组质粒筛选 | 第35-36页 |
| 2.2.7 XL1-Blue/pQE30-NS5菌株转化 | 第36页 |
| 2.2.8 目的蛋白NS5的诱导表达 | 第36-37页 |
| 2.2.9 鉴定表达产物 | 第37-38页 |
| 2.2.10 表达载体pQE30-NS5/C70的构建 | 第38-39页 |
| 2.2.11 多肽段NS5/C70的诱导表达优化 | 第39页 |
| 2.2.12 多肽段NS5/C70的鉴定 | 第39-41页 |
| 2.2.13 可溶性NS5/C70多肽段的大量表达与纯化 | 第41-42页 |
| 2.3 结果 | 第42-44页 |
| 2.3.1 重组质粒pQE30-NS5的鉴定电泳图 | 第42页 |
| 2.3.2 重组质粒pQE30-NS5/C70的鉴定电泳图 | 第42页 |
| 2.3.3 DENV-2NS5/C70多肽段表达条件的优化 | 第42-43页 |
| 2.3.4 重组多肽段NS5/C70的纯化 | 第43-44页 |
| 2.3.5 DENV-2NS5/C70多肽段的Westernblot | 第44页 |
| 2.4 讨论 | 第44-47页 |
| 2.4.1 DENV-2NS5/C70多肽段的重组表达系统的建立 | 第44-46页 |
| 2.4.2 DENV-2NS5/C70多肽段表达的条件优化 | 第46页 |
| 2.4.3 DENV-2NS5/C70的纯化 | 第46-47页 |
| 2.5 本章小结 | 第47-48页 |
| 第3章 登革病毒NS5C端70kDa片段的应用初探 | 第48-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 3.1.1 实验重组多肽 | 第48页 |
| 3.1.2 实验试剂和耗材 | 第48页 |
| 3.1.3 ELISA溶液配制 | 第48-49页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-51页 |
| 3.2.1 ELISA步骤 | 第49-50页 |
| 3.2.2 结果判断 | 第50-51页 |
| 3.3 结果 | 第51-52页 |
| 3.3.1 实验数据 | 第51-52页 |
| 3.3.2 重组多肽NS5/C70与四型感染DENV的病人和正常人血清反应性 | 第52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-54页 |
| 3.4.1 重组多肽段DENV-2NS5/C70的诊断应用 | 第52-54页 |
| 3.4.2 重组多肽段DENV-2NS5/C70的抗原性 | 第54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 结论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录 | 第64-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
