中文摘要 | 第3-5页 |
英文摘要 | 第5-7页 |
缩略词 | 第11-12页 |
1 绪论 | 第12-16页 |
1.1 课题的提出和研究意义 | 第12-14页 |
1.2 研究目的和研究内容 | 第14-15页 |
1.2.1 研究目的 | 第14页 |
1.2.2 研究内容 | 第14-15页 |
1.3 技术路线 | 第15-16页 |
2 HepG2肝癌细胞IR模型的建立 | 第16-26页 |
2.1 引言 | 第16页 |
2.2 材料、试剂和仪器 | 第16-17页 |
2.2.1 材料 | 第16页 |
2.2.2 试剂 | 第16-17页 |
2.2.3 仪器 | 第17页 |
2.3 溶液的配制 | 第17-18页 |
2.4 实验方法 | 第18-21页 |
2.4.1 HepG2肝癌细胞的培养 | 第18-19页 |
2.4.2 HepG2人肝癌细胞胰岛素抵抗模型的建立 | 第19页 |
2.4.3 葡萄糖摄取实验 | 第19-20页 |
2.4.4 葡萄糖消耗实验 | 第20页 |
2.4.5 ROS的测定 | 第20-21页 |
2.4.6 统计方法 | 第21页 |
2.5 实验结果与结论 | 第21-24页 |
2.5.1 不同高糖浓度对HepG2细胞葡萄糖摄取的影响 | 第21-22页 |
2.5.2 不同浓度高糖培养液对HepG2细胞糖消耗的影响 | 第22-23页 |
2.5.3 不同高糖浓度对HepG2细胞内产生ROS水平的影响 | 第23-24页 |
2.6 小结 | 第24-26页 |
3 仙鹤草活性组分对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢的影响 | 第26-34页 |
3.1 引言 | 第26页 |
3.2 材料、试剂和仪器 | 第26-27页 |
3.2.1 材料 | 第26-27页 |
3.2.2 试剂 | 第27页 |
3.2.3 仪器 | 第27页 |
3.3 溶液的配制 | 第27页 |
3.4 实验方法 | 第27-28页 |
3.4.1 FC和TC组分对HepG2细胞增殖的影响 | 第27-28页 |
3.4.2 葡萄糖摄取实验 | 第28页 |
3.4.3 葡萄糖消耗实验 | 第28页 |
3.4.4 统计方法 | 第28页 |
3.5 实验结果与讨论 | 第28-31页 |
3.5.1 仙鹤草活性组分对HepG2细胞增殖的影响 | 第28-29页 |
3.5.2 仙鹤草活性组分对IR-HepG2细胞糖摄取的影响 | 第29-30页 |
3.5.3 仙鹤草活性组分对IR-HepG2细胞糖消耗的影响 | 第30-31页 |
3.6 小结 | 第31-34页 |
4 仙鹤草活性组分通过Nrf2-ARE信号通路对胰岛素抵抗HepG2细胞氧化应激水平的调控 | 第34-50页 |
4.1 引言 | 第34-35页 |
4.2 材料、试剂和仪器 | 第35-37页 |
4.2.1 材料 | 第35页 |
4.2.2 试剂 | 第35-36页 |
4.2.3 仪器 | 第36-37页 |
4.3 溶液的配制 | 第37页 |
4.4 实验方法 | 第37-44页 |
4.4.1 ROS的测定 | 第37页 |
4.4.2 抗氧化酶SOD活性的检测 | 第37-38页 |
4.4.3 细胞氧化损伤标志物MDA的检测 | 第38-39页 |
4.4.4 细胞总mRNA的提取以及逆转录 | 第39-41页 |
4.4.5 荧光定量PCR | 第41-42页 |
4.4.6 细胞全蛋白的制备 | 第42-43页 |
4.4.7 细胞蛋白浓度的测定 | 第43-44页 |
4.4.8 统计方法 | 第44页 |
4.5 实验结果与讨论 | 第44-49页 |
4.5.1 仙鹤草对胰岛素抵抗模型细胞内ROS水平的影响 | 第44-45页 |
4.5.2 仙鹤草对胰岛素抵抗模型细胞内抗氧化酶SOD活性的影响 | 第45页 |
4.5.3 仙鹤草对胰岛素抵抗模型细胞内氧化性损伤标志物MDA水平的影响 | 第45-46页 |
4.5.4 仙鹤草对胰岛素抵抗模型Nrf2-ARE信号通路中Nrf2以及下游抗氧化酶基因NQO1,HO-1,γ-GCS和GSH-Px转录水平的调控 | 第46-49页 |
4.6 小结 | 第49-50页 |
5 仙鹤草活性组分对胰岛素抵抗HepG2细胞中JNK和IRS-1/PI3K/Akt信号途径的调控 | 第50-64页 |
5.1 引言 | 第50页 |
5.2 材料、试剂和仪器 | 第50页 |
5.3 Western blot主要试剂的配制 | 第50-51页 |
5.4 实验方法 | 第51-54页 |
5.4.1 细胞mRNA的提取以及逆转录 | 第51页 |
5.4.2 荧光定量PCR | 第51页 |
5.4.3 细胞全细胞蛋白的制备 | 第51-52页 |
5.4.4 细胞蛋白浓度的测定 | 第52页 |
5.4.5 Western Blot | 第52-54页 |
5.4.6 统计方法 | 第54页 |
5.5 实验结果与讨论 | 第54-61页 |
5.5.1 仙鹤草对胰岛素抵抗模型细胞JNK和IRS-1/PI3K/Akt信号通路相关基因mRNA表达的影响 | 第54-56页 |
5.5.2 仙鹤草活性组分对IR-HepG2细胞中JNK蛋白磷酸化的影响 | 第56-58页 |
5.5.3 仙鹤草对胰岛素抵抗模型细胞IRS-1/PI3K/Akt信号通路蛋白的表达和磷酸化的调控 | 第58-61页 |
5.6 小结 | 第61-64页 |
6 结论及后续工作建议 | 第64-68页 |
6.1 结论 | 第64-66页 |
6.2 后续工作建议 | 第66-68页 |
致谢 | 第68-70页 |
参考文献 | 第70-78页 |
附录 | 第78页 |
A. 作者在攻读硕士学位期间发表的论文题目 | 第78页 |
B. 作者在攻读硕士学位期间参与的科研项目 | 第78页 |