| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 绪论 | 第11-19页 |
| 1.1 类黄酮研究进展 | 第11页 |
| 1.2 类黄酮的基本结构和分类 | 第11页 |
| 1.3 类黄酮的生物学功能 | 第11-14页 |
| 1.3.1 类黄酮对植物本身的作用 | 第12-13页 |
| 1.3.2 对人类健康的作用 | 第13-14页 |
| 1.4 类黄酮次生代谢的基本途径 | 第14-15页 |
| 1.5 类黄酮代谢过程中的酶 | 第15-16页 |
| 1.6 转录因子 | 第16-17页 |
| 1.7 酵母单杂交实验 | 第17-18页 |
| 1.8 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 白洁和橙红丹桂类黄酮含量分析 | 第19-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 实验试剂和仪器 | 第19页 |
| 2.2 试验方法 | 第19-20页 |
| 2.2.1 桂花花瓣中类黄酮的提取 | 第19页 |
| 2.2.2 溶液的配制 | 第19-20页 |
| 2.2.3 色谱条件 | 第20页 |
| 2.3 结果与分析 | 第20-25页 |
| 2.3.1 绘制芦丁标准线性方程 | 第20-21页 |
| 2.3.2 桂花总黄酮含量测定 | 第21-22页 |
| 2.3.3 槲皮素标准品标准曲线的绘制 | 第22-24页 |
| 2.3.4 槲皮素含量的分析 | 第24-25页 |
| 2.4 讨论 | 第25-27页 |
| 3 类黄酮代谢途径相关基因的表达分析 | 第27-33页 |
| 3.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 3.1.1 植物材料处理 | 第27页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第27页 |
| 3.1.3 所用引物序列 | 第27-28页 |
| 3.2 试验方法 | 第28-30页 |
| 3.2.1 桂花花瓣RNA样品的提取 | 第28-29页 |
| 3.2.2 RNA的反转录 | 第29页 |
| 3.2.3 RT-PCR分析基因的相对表达量 | 第29-30页 |
| 3.2.4 荧光定量的实验流程 | 第30页 |
| 3.3 结果与分析 | 第30-32页 |
| 3.3.1 RT-PCR分析类黄酮代谢途径中的相关基因表达量 | 第30-31页 |
| 3.3.2 类黄酮代谢途径相关基因表达量的荧光定量PCR分析 | 第31-32页 |
| 3.4 讨论 | 第32-33页 |
| 4 MYB1基因在白洁花瓣中超表达对类黄酮代谢途径基因表达的影响 | 第33-43页 |
| 4.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 4.1.1 植物材料处理 | 第33页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第33页 |
| 4.1.3 菌株与质粒载体 | 第33页 |
| 4.1.4 试剂和培养基的配制 | 第33-34页 |
| 4.1.5 所用引物序列 | 第34页 |
| 4.2 试验方法 | 第34-39页 |
| 4.2.1 桂花花瓣RNA样品的提取 | 第34页 |
| 4.2.2 RNA的反转录 | 第34-35页 |
| 4.2.3 双链cDNA的合成 | 第35页 |
| 4.2.4 扩增片段的回收 | 第35-36页 |
| 4.2.5 35S-OfMYB1-GFP-NOS超表达重组载体的构建 | 第36页 |
| 4.2.6 E.coli感受态细胞的制备与转化 | 第36-38页 |
| 4.2.7 农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第38-39页 |
| 4.2.8 侵染桂花实验流程 | 第39页 |
| 4.2.9 RT-PCR的实验方法 | 第39页 |
| 4.2.10 荧光定量PCR流程 | 第39页 |
| 4.3 结果与分析 | 第39-41页 |
| 4.3.1 35S-OfMYB1-GFP-NOS超表达重组载体的构建 | 第39-40页 |
| 4.3.2 MYB1基因相对表达量的RT-PCR分析 | 第40-41页 |
| 4.3.3 荧光定量PCR分析MYB1基因超表达对类黄酮代谢途径相关基因表达量的影响 | 第41页 |
| 4.4 讨论 | 第41-43页 |
| 5 酵母单杂交试验验证MYB1调控PAL基因的功能 | 第43-51页 |
| 5.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第43页 |
| 5.1.2 质粒载体和菌株 | 第43页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第43页 |
| 5.1.4 实验溶液 | 第43-44页 |
| 5.2 实验方法 | 第44-47页 |
| 5.2.1 花瓣RNA的提取 | 第44页 |
| 5.2.2 RNA的反转录 | 第44页 |
| 5.2.3 元件的合成 | 第44页 |
| 5.2.4 pLacZi-MBP重组质粒的构建 | 第44-45页 |
| 5.2.5 pB42AD-ofMYB1重组质粒的构建 | 第45-46页 |
| 5.2.6 酵母感受态的制备和转化 | 第46-47页 |
| 5.2.7 酵母阳性克隆的筛选 | 第47页 |
| 5.3 结果与分析 | 第47-49页 |
| 5.3.1 空质粒pB42AD和空质粒pLacZi的酶切结果 | 第47页 |
| 5.3.2 pB42AD-ofMYB1和pLacZi-MBP重组载体的构建 | 第47-48页 |
| 5.3.3 酵母单杂交阳性克隆的显色 | 第48-49页 |
| 5.4 讨论 | 第49-51页 |
| 6 OfMYB1转录因子的原核蛋白表达 | 第51-55页 |
| 6.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第51页 |
| 6.1.2 质粒载体与菌株 | 第51页 |
| 6.1.3 溶液 | 第51-52页 |
| 6.2 实验方法 | 第52-53页 |
| 6.2.1 BL21 (DE3)感受态细胞的制备 | 第52页 |
| 6.2.2 PET30a-OfMYB1重组载体的构建 | 第52页 |
| 6.2.3 重组载体原核蛋白的诱导表达 | 第52页 |
| 6.2.4 SDS-PAGE凝胶电泳、染色及脱色 | 第52-53页 |
| 6.3 结果与分析 | 第53-54页 |
| 6.3.1 pET30a-OfMYB1重组载体的构建 | 第53页 |
| 6.3.2 PET30a-OfMYB1重组蛋白的表达 | 第53-54页 |
| 6.4 讨论 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第68-69页 |
