| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 1 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 立题依据 | 第12-19页 |
| 1.2.1 莱氏野村菌的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.2 微菌核的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.3 RacA 与 Cdc42 蛋白的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.4 RacA、Cdc42 与 NADPH 复合体以及 ROS 之间关系的研究 | 第16-19页 |
| 1.3 研究目的 | 第19-20页 |
| 1.4 研究内容和技术路线 | 第20-21页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第20页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第20-21页 |
| 1.5 本研究创新之处 | 第21-22页 |
| 2 racA 和 cdc42 全长 cDNA 与基因组的克隆与分析 | 第22-35页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 试验用菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 主要设备仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要溶液和培养基的配制 | 第23页 |
| 2.2 主要试验方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 莱氏野村菌微菌核的培养 | 第23页 |
| 2.2.2 莱氏野村菌微菌核总 RNA 的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.3 莱氏野村菌 RACE 技术的 cDNA 一链的获得 | 第24-25页 |
| 2.2.4 莱氏野村菌 RACE 技术的获得 cDNA 的全长 | 第25-27页 |
| 2.2.5 PCR 产物的测序 | 第27-28页 |
| 2.2.6 全长 cDNA 的测通及基因组的克隆 | 第28-29页 |
| 2.2.7 racA 和 cdc42 的生物信息学及进化分析 | 第29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-35页 |
| 2.3.1 racA 与 cdc42 的 3'/5'RACE 的扩增 | 第29-31页 |
| 2.3.2 racA 与 cdc42 的基因组克隆和序列分析 | 第31页 |
| 2.3.3 RacA 与 Cdc42 蛋白生物信息学及进化关系分析 | 第31-35页 |
| 3 racA、cdc42、noxA 和 noxR 的表达模式分析 | 第35-41页 |
| 3.1 试验材料 | 第35页 |
| 3.1.1 试验菌株 | 第35页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 3.1.3 主要设备及仪器 | 第35页 |
| 3.1.4 主要培养基 | 第35页 |
| 3.2 试验方法 | 第35-37页 |
| 3.2.1 微菌核形成的时期及材料收集 | 第35页 |
| 3.2.2 微菌核形成各个时期菌体 RNA 的提取及 cDNA 一链的合成 | 第35-36页 |
| 3.2.3 qPCR 引物设计 | 第36-37页 |
| 3.2.4 莱氏野村菌 racA、cdc42、noxA 和 noxR 的表达模式分析 | 第37页 |
| 3.2.5 qPCR 结果分析 | 第37页 |
| 3.3 试验结果与分析 | 第37-41页 |
| 3.3.1 微菌核形成的各个时期 | 第37-38页 |
| 3.3.2 racA 与 cdc42 的表达模式 | 第38-39页 |
| 3.3.3 noxA 与 noxR 的表达模式 | 第39-41页 |
| 4 RNAi 的方法研究 racA 与 cdc42 的功能 | 第41-53页 |
| 4.1 试验材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 试验菌株 | 第41页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 4.1.3 主要设备仪器 | 第41页 |
| 4.1.4 主要培养基和溶液 | 第41-42页 |
| 4.2 主要试验方法 | 第42-46页 |
| 4.2.1 莱氏野村菌 racA 与 cdc42 干扰引物的设计 | 第42页 |
| 4.2.2 莱氏野村菌 racA 与 cdc42 干扰片段扩增 | 第42-43页 |
| 4.2.3 dsRNA 的体外合成 | 第43-44页 |
| 4.2.4 dsRNA 的纯化 | 第44页 |
| 4.2.5 dsRNA 的酶切消化 | 第44页 |
| 4.2.6 siRNA 的纯化 | 第44-45页 |
| 4.2.7 siRNA 的转化（改良的 PEG/Licl 的方法） | 第45页 |
| 4.2.8 最适 siRNA 浓度的确定以及干扰效率的测定 | 第45页 |
| 4.2.9 菌落形态、菌丝两态型转变、孢子形态以及产孢量的测定 | 第45-46页 |
| 4.2.10 菌丝及微菌核形态、微菌核数量的测定 | 第46页 |
| 4.2.11 Reactive Oxygen Species (ROS)的检测 | 第46页 |
| 4.2.12 干扰后 NOX 复合体的表达模式 | 第46页 |
| 4.2.13 毒力生测 | 第46页 |
| 4.2.14 数据处理 | 第46页 |
| 4.3 试验结果与分析 | 第46-53页 |
| 4.3.1 最适 siRNA 浓度的确定以及干扰效率的测定 | 第46-47页 |
| 4.3.2 菌落形态、菌丝两态型转变、孢子形态以及产孢量的测定 | 第47-48页 |
| 4.3.3 菌丝及微菌核形态、微菌核数量的测定 | 第48-50页 |
| 4.3.4 ROS 的检测以及干扰后 NOX 复合体的表达模式 | 第50-51页 |
| 4.3.5 毒力生测 | 第51-53页 |
| 5 racA、cdc42、noxA、noxR 和 cdc24 之间关系初探 | 第53-56页 |
| 5.1 试验材料 | 第53页 |
| 5.2 试验方法 | 第53页 |
| 5.3 试验结果与分析 | 第53-56页 |
| 6 讨论 | 第56-59页 |
| 7 主要结论及后续工作 | 第59-60页 |
| 7.1 主要研究结论 | 第59页 |
| 7.2 后续试验建议 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录 作者在攻读硕士学位期间发表论文的目录 | 第67页 |
