| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 文章中的缩略词 | 第9-13页 |
| 1 研究背景与意义 | 第13-25页 |
| 1.1 杆状病毒 | 第13-15页 |
| 1.1.1 杆状病毒分类 | 第13页 |
| 1.1.2 杆状病毒的病毒体 | 第13-14页 |
| 1.1.3 杆状病毒的感染周期 | 第14-15页 |
| 1.2 杆状病毒的分子生物学研究 | 第15-20页 |
| 1.2.1 杆状病毒的核心基因 | 第15-16页 |
| 1.2.2 杆状病毒的结构蛋白 | 第16-20页 |
| 1.3 杆状病毒与宿主间的相互作用 | 第20-22页 |
| 1.4 蛋白质相互作用研究方法 | 第22-23页 |
| 1.4.1 酵母双杂交技术 | 第22页 |
| 1.4.2 双分子荧光互补技术 | 第22-23页 |
| 1.4.3 免疫共沉淀技术 | 第23页 |
| 1.4.4 GST-pull down技术 | 第23页 |
| 1.5 研究意义 | 第23-25页 |
| 2 实验材料和设备 | 第25-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-34页 |
| 2.1.1 大肠杆菌菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 酵母菌菌株 | 第25页 |
| 2.1.3 昆虫细胞系 | 第25页 |
| 2.1.4 病毒与质粒 | 第25-26页 |
| 2.1.5 酶与抗生素 | 第26页 |
| 2.1.6 常用培养基 | 第26-28页 |
| 2.1.7 常用溶液及缓冲液配方 | 第28-33页 |
| 2.1.8 其他常用试剂与试剂盒 | 第33页 |
| 2.1.9 引物合成与测序 | 第33-34页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 2.3 本文所构建的重组质粒和病毒 | 第35-36页 |
| 3 实验方法与步骤 | 第36-55页 |
| 3.1 重组质粒构建 | 第36-41页 |
| 3.1.1 目的片段PCR | 第36-37页 |
| 3.1.2 DNA胶回收试剂盒回收PCR产物 | 第37页 |
| 3.1.3 碱裂解法提取质粒 | 第37-38页 |
| 3.1.4 载体与目的片段的酶切 | 第38-39页 |
| 3.1.5 酶切后的载体与目的片段回收 | 第39页 |
| 3.1.6 载体与目的片段的连接 | 第39页 |
| 3.1.7 质粒或酶连反应体系的转化 | 第39-40页 |
| 3.1.8 酶切验证重组质粒 | 第40-41页 |
| 3.1.9 CaCl_2处理法制备DH5α感受态 | 第41页 |
| 3.2 转座及重组Bacmind验证 | 第41-43页 |
| 3.2.1 转座 | 第41-42页 |
| 3.2.2 重组Bacmid提取 | 第42页 |
| 3.2.3 PCR验证重组Bacmid | 第42-43页 |
| 3.3 细胞培养及转染感染实验 | 第43-45页 |
| 3.3.1 细胞传代培养 | 第43页 |
| 3.3.2 重组Bacmid转染Sf9细胞 | 第43-44页 |
| 3.3.3 病毒感染Sf9细胞 | 第44-45页 |
| 3.4 非特异性抗体中和 | 第45页 |
| 3.5 SDS-PAGE与Western blot | 第45-47页 |
| 3.6 双荧光亚细胞共定位实验 | 第47页 |
| 3.7 双分子荧光互补实验 | 第47-48页 |
| 3.8 免疫共沉淀实验 | 第48-49页 |
| 3.9 GST-Pull down实验 | 第49-50页 |
| 3.10 e25截短突变体的构建 | 第50-51页 |
| 3.11 回交实验 | 第51-55页 |
| 3.11.1 制备Y187感受态 | 第51页 |
| 3.11.2 转化质粒进Y187感受态细胞 | 第51-52页 |
| 3.11.3 回交探寻相互作用位点 | 第52-55页 |
| 4 实验结果 | 第55-68页 |
| 4.1 AcMNPV ODV-E25(E25)与P21在Sf9细胞中的亚细胞共定位分析 | 第55-57页 |
| 4.1.1 共定位重组Bacmid的构建 | 第55-56页 |
| 4.1.2 AcMNPV E25与P21在Sf9细胞中的亚细胞定位结果 | 第56-57页 |
| 4.2 AcMNPV E25与RPL41及P21双分子荧光互补分析 | 第57-60页 |
| 4.2.1 双分子荧光互补实验重组Bacmid的构建 | 第57-58页 |
| 4.2.2 AcMNPV E25与RPL41双分子荧光互补分析 | 第58-59页 |
| 4.2.3 AcMNPV E25与P21双分子荧光互补分析 | 第59-60页 |
| 4.3 AcMNPV E25与RPL41及P21免疫共沉淀分析 | 第60-62页 |
| 4.3.1 AcMNPV E25与RPL41免疫共沉淀分析 | 第60-61页 |
| 4.3.2 AcMNPV E25与P21免疫共沉淀分析 | 第61-62页 |
| 4.4 AcMNPV E25与ADH及eIF3G GST-Pull down分析 | 第62-65页 |
| 4.4.1 GST-Pull down重组Bacmid的构建 | 第62-64页 |
| 4.4.2 AcMNPV E25与ADH(或eIF3G)GST-Pull down分析结果 | 第64-65页 |
| 4.5 e25截短突变体的构建及回交 | 第65-68页 |
| 4.5.1 e25截短突变体的构建 | 第65-66页 |
| 4.5.2 回交结果 | 第66-68页 |
| 5 讨论 | 第68-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 在校期间发表的论文 | 第81-82页 |
| 为本论文提供支持的国家自然科学基金项目 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
