| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 基于荧光共振能量转移（FRET)构建的锌离子荧光蛋白探针 | 第10-36页 |
| 1、引言 | 第10-12页 |
| 2、实验材料及基本实验操作 | 第12-17页 |
| 2.1 实验材料 | 第12-14页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第12页 |
| 2.1.2 分子生物学试剂 | 第12页 |
| 2.1.3 培养基 | 第12-13页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第13-14页 |
| 2.1.5 引物合成和DNA序列测定 | 第14页 |
| 2.2 基本实验操作 | 第14-17页 |
| 2.2.1 感受态细胞的大量制备 | 第14-15页 |
| 2.2.2 感受态细胞转化 | 第15页 |
| 2.2.3 质粒DNA的小量制备 | 第15页 |
| 2.2.4 割胶回收DNA片段 | 第15-17页 |
| 3、实验方法 | 第17-25页 |
| 3.1 基于FRET的锌离子荧光蛋白探针的FRET原理图示 | 第17-18页 |
| 3.2 锌离子荧光蛋白探针表达质粒的构建 | 第18-19页 |
| 3.2.1 真核表达质粒构建 | 第18-19页 |
| 3.2.2 原核表达质粒的构建 | 第19页 |
| 3.3 体外实验部分 | 第19-23页 |
| 3.3.1 重组蛋白的体外诱导表达 | 第19-20页 |
| 3.3.2 重组蛋白的体外纯化 | 第20页 |
| 3.3.3 表达蛋白SDS-PAGE鉴定 | 第20页 |
| 3.3.4 Bradford法测定纯化的荧光蛋白探针浓度 | 第20-21页 |
| 3.3.5 体外等温滴定法测定锌离子荧光探针与锌离子和铜离子的结合 | 第21页 |
| 3.3.6 体外锌离子荧光蛋白探针的荧光光谱检测 | 第21页 |
| 3.3.7 锌离子荧光探针体外对锌离子反应特异性检测 | 第21-22页 |
| 3.3.8 各种金属离子对锌离子荧光蛋白探针的竞争性检测 | 第22-23页 |
| 3.4 体内实验部分 | 第23-25页 |
| 3.4.1 细胞培养 | 第23页 |
| 3.4.2 基因转染 | 第23页 |
| 3.4.3 活细胞内锌离子荧光蛋白探针用于锌离子的成像 | 第23-25页 |
| 4、实验结果 | 第25-34页 |
| 4.1 体外实验结果 | 第25-32页 |
| 4.1.1 锌离子荧光蛋白探针质粒的构建与鉴定 | 第25页 |
| 4.1.2 锌离子荧光蛋白探针的体外表达及纯化 | 第25-26页 |
| 4.1.3 体外ITC测定锌离子荧光探针与锌离子和铜离子的结合 | 第26-28页 |
| 4.1.4 探针体外与锌离子反应荧光光谱检测 | 第28-30页 |
| 4.1.5 锌离子荧光探针体外对锌离子反应特异性检测 | 第30页 |
| 4.1.6 各种金属离子对锌离子荧光蛋白探针的竞争性检测 | 第30-32页 |
| 4.2 体内实验结果 | 第32-34页 |
| 4.2.1 活细胞内锌离子荧光蛋白探针用于锌离子的成像 | 第32-33页 |
| 4.2.2 细胞内游离锌离子浓度计算公式推算 | 第33-34页 |
| 5 、讨论 | 第34-36页 |
| 第二章：综述 | 第36-54页 |
| 一、荧光蛋白 | 第36-43页 |
| 1 、荧光蛋白的历史 | 第36页 |
| 2 、荧光蛋白基本结构与特征 | 第36-39页 |
| 3 、GFP的各种颜色突变体及其他荧光蛋白 | 第39-41页 |
| 4 、荧光蛋白的荧光优点及在应用 | 第41-43页 |
| 二、荧光共振能量转移技术及以FRET构建的荧光探针 | 第43-54页 |
| 1、荧光发射原理与荧光共振能量转移 | 第43-46页 |
| 2、FRET探针 | 第46-47页 |
| 3、FRET的应用 | 第47-53页 |
| 4、现有FRET方法的主要问题和荧光蛋白FRET探针的优化 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
