| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 英文缩略词表 | 第16-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-37页 |
| 1.1 GABA概述 | 第18-30页 |
| 1.1.1 GABA的理化性质 | 第19-20页 |
| 1.1.2 GABA的自然分布 | 第20页 |
| 1.1.3 GABA代谢 | 第20-21页 |
| 1.1.4 γ-氨基丁酸的生理机能 | 第21-25页 |
| 1.1.5 γ-氨基丁酸应用 | 第25-27页 |
| 1.1.6 γ-氨基丁酸的制备 | 第27-30页 |
| 1.2 谷氨酸脱羧酶概述 | 第30-34页 |
| 1.2.1 谷氨酸脱羧酶的生化性质 | 第30页 |
| 1.2.2 哺乳类动物及人来源谷氨酸脱羧酶 | 第30-31页 |
| 1.2.3 植物来源谷氨酸脱羧酶 | 第31-32页 |
| 1.2.4 微生物来源谷氨酸脱羧酶 | 第32-33页 |
| 1.2.5 昆虫来源谷氨酸脱羧酶 | 第33-34页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第34-36页 |
| 1.4 实验路线 | 第36-37页 |
| 第二章 谷氨酸脱羧酶基因的克隆 | 第37-64页 |
| 2.1 引言 | 第37页 |
| 2.2 实验材料 | 第37-41页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第37-38页 |
| 2.2.2 菌种及质粒 | 第38-39页 |
| 2.2.3 工具酶与试剂盒 | 第39页 |
| 2.2.4 培养基 | 第39-40页 |
| 2.2.5 试剂 | 第40-41页 |
| 2.3 实验方法 | 第41-51页 |
| 2.3.1 GABA的测定 | 第41-44页 |
| 2.3.2 高产GABA植物乳杆菌的筛选 | 第44-45页 |
| 2.3.3 植物乳杆菌来源的GAD基因的克隆 | 第45-51页 |
| 2.3.4 序列测定及分析 | 第51页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第51-62页 |
| 2.4.1 GABA浓度的测定 | 第51-54页 |
| 2.4.2 高产GABA植物乳杆菌的筛选 | 第54-55页 |
| 2.4.3 Lb.plantarum YM-4-3由来GAD基因克隆 | 第55-62页 |
| 2.5 本章小结 | 第62-64页 |
| 第三章 植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶的表达纯化 | 第64-84页 |
| 3.1 引言 | 第64页 |
| 3.2 实验材料 | 第64-65页 |
| 3.2.1 分子生物学试剂盒与工具酶 | 第64页 |
| 3.2.2 生化试剂 | 第64页 |
| 3.2.3 实验培养基 | 第64-65页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第65页 |
| 3.3 实验方法 | 第65-75页 |
| 3.3.1 pET28a-gad表达载体的构建 | 第65-68页 |
| 3.3.2 谷氨酸脱羧酶的蛋白表达 | 第68-69页 |
| 3.3.3 聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第69-71页 |
| 3.3.4 目的蛋白的大规模表达和纯化 | 第71-74页 |
| 3.3.5 GAD粗酶活力测定 | 第74页 |
| 3.3.6 蛋白含量的测定 | 第74-75页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第75-82页 |
| 3.4.1 E.coli BL21/pET28a-gad谷氨酸脱羧酶表达工程菌构建 | 第75-81页 |
| 3.4.2 重组谷氨酸脱羧酶的纯化 | 第81-82页 |
| 3.5 本章小结 | 第82-84页 |
| 第四章 植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶酶性质的初步研究 | 第84-92页 |
| 4.1 引言 | 第84页 |
| 4.2 实验材料 | 第84-85页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第84-85页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第85页 |
| 4.3 GAD酶性质的初步研究 | 第85-86页 |
| 4.3.1 温度对酶活力的影响 | 第85页 |
| 4.3.2 pH对酶活力的影响 | 第85-86页 |
| 4.3.3 辅酶PLP对酶活力的影响 | 第86页 |
| 4.3.4 菌株E.coli BL21/pET28a-gad的生长曲线 | 第86页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第86-91页 |
| 4.4.1 温度对酶活的影响 | 第86-88页 |
| 4.4.2 pH对酶活的影响 | 第88-89页 |
| 4.4.3 PLP对酶活的影响 | 第89-90页 |
| 4.4.4 E.coli BL21/pET28a-gad的生长曲线 | 第90-91页 |
| 4.5 本章小结 | 第91-92页 |
| 第五章 总结 | 第92-94页 |
| 5.1 高产GABA的植物乳杆菌的筛选及GAD基因克隆 | 第92页 |
| 5.2 GAD的表达纯化 | 第92页 |
| 5.3 GAD酶学性质的初步研究 | 第92-93页 |
| 5.4 展望 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-102页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第102-103页 |
| 附录B 其他需要说明的内容 | 第103页 |
