| 摘要 | 第2-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 缩略词表 | 第9-11页 |
| 文献综述 | 第11-16页 |
| 第一章 新城疫病毒耐热株HR09鉴定及其全基因组序列测定 | 第16-26页 |
| 1.1 材料 | 第16-17页 |
| 1.1.1 毒株 | 第16页 |
| 1.1.2 细胞及鸡胚 | 第16页 |
| 1.1.3 主要实验试剂 | 第16页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第16-17页 |
| 1.2 方法 | 第17-21页 |
| 1.2.1 耐热性测定 | 第17页 |
| 1.2.2 病毒纯化 | 第17-18页 |
| 1.2.3 HR09株全基因组序列测定及分析 | 第18-20页 |
| 1.2.3.1 引物设计与合成 | 第18-19页 |
| 1.2.3.2 病毒RNA的提取及RT-PCR | 第19-20页 |
| 1.2.3.3 目的片段的克隆与鉴定 | 第20页 |
| 1.2.3.4 5'RACE和3'RACE | 第20页 |
| 1.2.3.5 序列测定与分析 | 第20页 |
| 1.2.4 生物学特性的研究 | 第20-21页 |
| 1.2.4.1 1CPI的测定 | 第20-21页 |
| 1.2.4.2 IVPI的测定 | 第21页 |
| 1.2.4.3 MDT的测定 | 第21页 |
| 1.3 结果 | 第21-25页 |
| 1.3.1 耐热性测定 | 第21-22页 |
| 1.3.2 病毒纯化 | 第22页 |
| 1.3.3 HR09株生物学特性 | 第22页 |
| 1.3.4 HR09株全基因组序列测定 | 第22-23页 |
| 1.3.5 HR09株全基因组序列分析 | 第23-25页 |
| 1.4 小结与讨论 | 第25-26页 |
| 第二章 HR09耐热株反向遗传操作系统的建立 | 第26-41页 |
| 2.1 材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 病毒 | 第26页 |
| 2.1.2 细胞及鸡胚 | 第26页 |
| 2.1.3 主要实验试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-37页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第27-28页 |
| 2.2.2 HR09全基因组cDNA各片段的克隆与测序 | 第28-29页 |
| 2.2.3 HR09全基因组cDNA转录载体的构建 | 第29-33页 |
| 2.2.3.1 HR09全基因组各片段重组质粒的提取 | 第29页 |
| 2.2.3.2 HR09基因组5'端及3'端的连接 | 第29-30页 |
| 2.2.3.3 中间质粒TM (2296nt-13048nt)的构建 | 第30-32页 |
| 2.2.3.4 含HR09株全基因组cDNA的转录载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.3.5 HR09株全基因组cDNA的转录载体的鉴定 | 第33页 |
| 2.2.4 辅助质粒的构建与鉴定 | 第33-36页 |
| 2.2.4.1 辅助质粒pCI-NP、pCI-P的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.4.2 辅助质粒pCI-L的构建 | 第34-36页 |
| 2.2.4.4 辅助质粒的鉴定 | 第36页 |
| 2.2.5 病毒的拯救和鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.5.1 细胞和转染用质粒的准备 | 第36页 |
| 2.2.5.2 共转染 | 第36-37页 |
| 2.2.5.3 获救病毒的鉴定 | 第37页 |
| 2.2.6 获救病毒的耐热测定 | 第37页 |
| 2.2.7 MDT和ICPI的测定 | 第37页 |
| 2.3 结果 | 第37-40页 |
| 2.3.1 HR09全长基因组cDNA各片段的扩增结果 | 第37页 |
| 2.3.2 HR09全基因组cDNA转录载体的鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3.3 辅助质粒的构建和鉴定结果 | 第38-39页 |
| 2.3.4 获救病毒的鉴定 | 第39页 |
| 2.3.5 获救病毒耐热性测定结果 | 第39页 |
| 2.3.6 获救病毒MDT和ICPI测定结果 | 第39-40页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 HR09耐热株致弱拯救研究 | 第41-47页 |
| 3.1 材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 质粒 | 第41页 |
| 3.1.2 细胞及鸡胚 | 第41页 |
| 3.1.3 主要实验试剂 | 第41页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第41-42页 |
| 3.2 方法 | 第42-44页 |
| 3.2.1 引物设计与合成 | 第42页 |
| 3.2.2 片段Rr1和片段Rr2的克隆与测序 | 第42-43页 |
| 3.2.3 prNDV/HR09全基因组cDNA转录载体的构建 | 第43页 |
| 3.2.3.1 片段Rr1和片段Rr2重组质粒的提取 | 第43页 |
| 3.2.3.2 重组质粒T-Rr12的构建 | 第43页 |
| 3.2.4 病毒的拯救和鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2.4.1 细胞和转染用质粒的准备 | 第43页 |
| 3.2.4.2 共转染 | 第43-44页 |
| 3.2.4.3 鉴定 | 第44页 |
| 3.2.5 获救病毒的耐热试验 | 第44页 |
| 3.2.6 获救病毒的生物学特性的测定 | 第44页 |
| 3.2.7 获救病毒的感染性试验 | 第44页 |
| 3.3 结果 | 第44-46页 |
| 3.3.1 片段Rr1和片段Rr2的扩增结果 | 第44页 |
| 3.3.2 片段Rr12的扩增结果 | 第44-45页 |
| 3.3.3 获救病毒的鉴定 | 第45页 |
| 3.3.4 获救病毒的耐热试验结果 | 第45页 |
| 3.3.5 获救病毒的生物学试验结果 | 第45页 |
| 3.3.6 获救病毒的细胞感染性试验结果 | 第45-46页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第46-47页 |
| 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
