| 目录 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 上篇 文献综述 | 第14-36页 |
| 第一章 hrp基因及其编码的Harpin蛋白的特性 | 第15-21页 |
| 1 植物病原细菌的hrp基因和Harpin蛋白 | 第15-17页 |
| 2 Harpin在植物上的有益效应 | 第17-21页 |
| ·诱导植物抗病性 | 第18-19页 |
| ·诱导植物的抗虫性 | 第19页 |
| ·诱导植株抗旱反应 | 第19页 |
| ·增加植物产量 | 第19-21页 |
| 第二章 植物病毒病的生物防治研究进展 | 第21-27页 |
| 1 植物病毒病概述 | 第21-22页 |
| 2 植物病毒病的主要防治方法 | 第22-24页 |
| ·预防为主,综合防治 | 第22页 |
| ·选育和推广应用抗病良种 | 第22-23页 |
| ·化学防治 | 第23页 |
| ·生物防治 | 第23-24页 |
| 3 生防制剂防治病毒病研究进展 | 第24-27页 |
| ·我国生物农药的发展现状与研究进展 | 第24页 |
| ·蛋白质农药防治病毒病研究进展 | 第24-27页 |
| 第三章 转基因植物研究进展 | 第27-36页 |
| 1 植物遗传转化方法 | 第27-33页 |
| ·土壤杆菌介导的基因转移 | 第27-30页 |
| ·叶盘转化法 | 第29-30页 |
| ·原生质体共培养转化法 | 第30页 |
| ·整株感染法 | 第30页 |
| ·DNA直接导入的基因转化技术 | 第30-32页 |
| ·聚乙二醇(PEG)介导的基因转化 | 第30页 |
| ·基因枪法 | 第30-31页 |
| ·脂质体介导法 | 第31页 |
| ·电穿孔法 | 第31页 |
| ·微注射法 | 第31页 |
| ·超声波介导法 | 第31-32页 |
| ·低能离子束介导法 | 第32页 |
| ·种质系统的基因转移 | 第32-33页 |
| ·子房注射法 | 第32页 |
| ·花粉管通道 | 第32-33页 |
| 2 转基因技术的应用 | 第33-34页 |
| ·转基因技术在植物遗传改良上的应用 | 第33页 |
| ·转基因技术在医药上的应用 | 第33-34页 |
| ·转基因技术在环境保护上的应用 | 第34页 |
| ·转基因技术在食品工业上的应用 | 第34页 |
| 3 转基因产品的潜在风险 | 第34-35页 |
| 4 小结 | 第35-36页 |
| 下篇 研究内容 | 第36-87页 |
| 第一章 青枯劳尔氏菌PopW蛋白诱导植物抗病性研究 | 第37-57页 |
| 1 材料与方法 | 第39-46页 |
| ·植物、病原物及PopW的制备 | 第39-40页 |
| ·菌株和植物 | 第39页 |
| ·病原菌以及其接种方法 | 第39页 |
| ·PopW抗菌蛋白制备 | 第39-40页 |
| ·常用试剂配制 | 第40-42页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·缓冲液 | 第40-41页 |
| ·SDS-PAEG胶的制备 | 第41-42页 |
| ·不同IPTG浓度对PopW蛋白表达量的影响 | 第42页 |
| ·不同浓度PopW蛋白对烟草抗病性影响 | 第42-43页 |
| ·PopW蛋白诱导烟草对TMV抗病性最佳诱导时期和持效期 | 第43页 |
| ·PopW蛋白诱导植物PR-1α基因表达检测 | 第43-45页 |
| ·植物RNA的提取(Trizol法) | 第43页 |
| ·sscDNA的合成 | 第43-44页 |
| ·引物的设计 | 第44-45页 |
| ·PopW蛋白大曰防病、促生试验 | 第45-46页 |
| ·PopW蛋白对番茄叶霉病的防治 | 第45页 |
| ·PopW蛋白对水稻稻曲病的防治 | 第45-46页 |
| ·PopW蛋白大田促生试验 | 第46页 |
| ·数据分析 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-52页 |
| ·不同IPTG浓度梯度对PopW蛋白表达量的影响 | 第46-48页 |
| ·PopW蛋白诱导烟草对TMV抗病性的最佳浓度 | 第48-49页 |
| ·PopW蛋白诱导抗病性持效性 | 第49-50页 |
| ·PopW蛋白诱导烟草对TMV抗病性最佳诱导时期和持效期 | 第49页 |
| ·PopW蛋白诱导抗病性与priming(引发效应)相关 | 第49-50页 |
| ·PopW蛋白大田防治试验 | 第50-52页 |
| ·PopW蛋白对番茄叶霉病的防治效果 | 第50-51页 |
| ·PopW蛋白对水稻稻曲病的防治效果 | 第51-52页 |
| ·PopW蛋白大田促生试验 | 第52页 |
| 3. 讨论 | 第52-57页 |
| 第二章 烟草转popW基因载体的构建 | 第57-75页 |
| 1 材料和方法 | 第58-70页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·菌株 | 第58-59页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| ·培养基 | 第59页 |
| ·目的基因的克隆 | 第59-63页 |
| ·青枯劳尔氏菌ZJ3721基因组DNA的提取 | 第59-60页 |
| ·目的基因的克隆 | 第60页 |
| ·目的基因的PCR扩增及产物纯化 | 第60-61页 |
| ·PCR产物与克隆载体的连接 | 第61页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第61-62页 |
| ·连接产物的转化 | 第62页 |
| ·质粒提取 | 第62-63页 |
| ·酶切验证 | 第63页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第63-67页 |
| ·大量提取质粒 | 第63-65页 |
| ·琼脂糖电泳分析 | 第65页 |
| ·质粒酶切 | 第65-66页 |
| ·琼脂糖凝胶DNA片段回收 | 第66页 |
| ·将目的基因连接到pBI121载体上 | 第66-67页 |
| ·重组质粒的验证 | 第67-70页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第67-68页 |
| ·连接产物的转化 | 第68页 |
| ·菌落PCR验证 | 第68-69页 |
| ·质粒提取 | 第69页 |
| ·酶切验证 | 第69-70页 |
| ·重组质粒测序验证 | 第70页 |
| ·重组质粒导入土壤杆菌 | 第70页 |
| ·土壤杆菌感受态细胞的制备 | 第70页 |
| ·土壤杆菌感受态细胞的转化 | 第70页 |
| ·转化子的鉴定 | 第70页 |
| 2 结果和分析 | 第70-73页 |
| ·目的基因popW的克隆 | 第70-71页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第71-72页 |
| ·重组质粒的验证和转化 | 第72-73页 |
| 3 讨论 | 第73-75页 |
| 第三章 转基因烟草的产生和鉴定 | 第75-87页 |
| 1 材料和方法 | 第76-82页 |
| ·植物和微生物材料 | 第76页 |
| ·抗生素和生长素 | 第76页 |
| ·培养基 | 第76-77页 |
| ·转基因烟草的产生 | 第77页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第77-79页 |
| ·烟草基因组DNA的提取 | 第77-78页 |
| ·PCR扩增引物 | 第78页 |
| ·PCR扩增反应体系 | 第78-79页 |
| ·PCR扩增反应条件 | 第79页 |
| ·PCR产物的检测 | 第79页 |
| ·PCR产物测序 | 第79页 |
| ·转基因烟草总RNA的提取及RT-PCR扩增 | 第79-82页 |
| ·转基因烟草总RNA的提取 | 第79-80页 |
| ·RNA的纯化 | 第80页 |
| ·紫外分光光度计检测RNA浓度及纯度 | 第80-81页 |
| ·RNA的保存 | 第81页 |
| ·逆转录反应合成cDNA | 第81页 |
| ·RT-RCR | 第81-82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-85页 |
| ·转基因烟草的获得 | 第82-83页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第83-84页 |
| ·PCR产物测序及序列分析结果 | 第84-85页 |
| ·T1代转基因植株的RT-PCR分析 | 第85页 |
| 3 讨论 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-101页 |
| 缩略语 | 第101-103页 |
| 附录 | 第103-105页 |
| 攻读学位期间完成的学术论文 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
