| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词索引表 | 第7-11页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| ·口蹄疫的研究进展 | 第11-14页 |
| ·FMDV的生物学特性 | 第12-13页 |
| ·FMD的流行病学 | 第13页 |
| ·FMDV的感染机制 | 第13-14页 |
| ·树突状细胞的研究进展 | 第14-18页 |
| ·DC的起源和分类 | 第14-15页 |
| ·DC的生物学特性 | 第15页 |
| ·DC的抗原提呈途径 | 第15-17页 |
| ·DC与FMDV的关系 | 第17-18页 |
| ·T细胞介导的细胞免疫应答 | 第18-19页 |
| ·CD4~+T细胞介导的免疫应答 | 第18页 |
| ·CD8~+T细胞介导的免疫应答 | 第18-19页 |
| ·细胞免疫应答的基本过程 | 第19页 |
| ·T细胞应答的生物学作用 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 2 实验材料、仪器及试剂 | 第22-29页 |
| ·菌株、载体和细胞 | 第22页 |
| ·主要实验材料 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·主要试剂配制 | 第23-29页 |
| 3. 实验方法 | 第29-42页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-VP1的构建 | 第29-33页 |
| ·重组质粒pUC57-VP1的小量制备 | 第29-30页 |
| ·重组质粒pUC57-VP1的酶切鉴定 | 第30页 |
| ·目的基因VP1的回收 | 第30-31页 |
| ·原核表达载体pET32a(+)的制备 | 第31页 |
| ·原核表达载体pET32a(+)质粒的酶切鉴定 | 第31页 |
| ·目的基因pET32a(+)的回收 | 第31页 |
| ·VP1与pET32a(+)的定向连接 | 第31-32页 |
| ·连接产物转化感受态细胞DH5a | 第32-33页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-VP1的DNA序列测定 | 第33页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-VP1转化感受态细胞BL21(DE3) | 第33-34页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-VP1和pET32a(+)质粒转化感受态细胞BL21(DE3) | 第33页 |
| ·转化质粒pET32a(+)-VP1和pET32a(+)的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·转化BL21(DE3)的重组质粒pET32a(+)-VP1的DNA序列测定 | 第34页 |
| ·重组菌pET32a(+)-VP1的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·重组表达菌的诱导表达 | 第34页 |
| ·重组蛋白最佳诱导表达条件的确定 | 第34-35页 |
| ·表达蛋白的可溶性检测 | 第35页 |
| ·重组蛋白的纯化回收 | 第35-38页 |
| ·包涵体的分离 | 第35页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第35-36页 |
| ·包涵体的溶解 | 第36页 |
| ·包涵体的梯度透析复性 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE | 第36-37页 |
| ·电洗脱以及蛋白质的浓缩 | 第37-38页 |
| ·蛋白质浓度的测定及保存 | 第38页 |
| ·重组蛋白的western blot鉴定 | 第38页 |
| ·实验动物 | 第38-39页 |
| ·细胞培养 | 第39-40页 |
| ·骨髓源树突状细胞的制备 | 第39页 |
| ·小鼠淋巴结T细胞的制备 | 第39-40页 |
| ·负载FMDV VP1的DC激活淋巴结T细胞的检测 | 第40-41页 |
| ·负载VP1的BMDC与淋巴结T细胞共培养 | 第40页 |
| ·共培养上清中IFN-γ和IL-4的检测 | 第40-41页 |
| ·统计学分析 | 第41-42页 |
| 4 结果 | 第42-55页 |
| ·重组质粒pUC57-VP1的酶切鉴定 | 第42页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-VP1的构建 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-VP1的序列测定 | 第43-44页 |
| ·重组表达质粒pET32a(+)-VP1的测序鉴定结果 | 第44页 |
| ·重组表达菌的诱导表达和SDS-PAGE分析 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白最佳诱导条件的确定 | 第45-47页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第45页 |
| ·最佳诱导温度的确定 | 第45-46页 |
| ·最佳诱导剂浓度的确定 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白的超声波裂解 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白的纯化及浓度测定 | 第48-49页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第48-49页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第49页 |
| ·重组蛋白的western blot鉴定 | 第49-50页 |
| ·BMDC体外培养生长情况 | 第50-51页 |
| ·负载FMDV VP1的BMDC激活T细胞表达IFN-γ和IL-4的检测 | 第51-55页 |
| 5 讨论 | 第55-61页 |
| ·重组菌pET32a(+)-VP1在大肠杆菌中的诱导表达 | 第55-56页 |
| ·重组蛋白包涵体的纯化 | 第56-59页 |
| ·包涵体的分离 | 第57页 |
| ·包涵体的洗涤与溶解 | 第57-58页 |
| ·包涵体的复性 | 第58-59页 |
| ·负载FMDV VP1的DC激活淋巴结T细胞的研究 | 第59-61页 |
| 6 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 附图及说明 | 第69-71页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第71-73页 |
| 作者简历 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
