| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-23页 |
| ·香蕉及蕉类作物的主要病害 | 第10-11页 |
| ·香蕉 | 第10页 |
| ·香蕉的主要病害 | 第10-11页 |
| ·香蕉枯萎病的研究进展 | 第11-15页 |
| ·香蕉枯萎病的发生及危害 | 第11-12页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌的生理小种 | 第12页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌的生物学特性 | 第12-13页 |
| ·病原菌侵染途径及致病机理 | 第13页 |
| ·香蕉枯萎病发病症状 | 第13-14页 |
| ·香蕉枯萎病的防治方法 | 第14-15页 |
| ·丝状真菌的遗传转化研究 | 第15-20页 |
| ·研究概况 | 第15-16页 |
| ·CaCl2-PEG(polythylene glycol,聚乙二醇)转化方法 | 第16页 |
| ·限制性内切酶介导转化(REMI) | 第16-17页 |
| ·电击转化法 | 第17-18页 |
| ·基因枪法(Particle gun) | 第18页 |
| ·根癌农杆菌介导丝状真菌遗传转化研究 | 第18-20页 |
| ·绿色荧光蛋白 | 第20-21页 |
| ·CHELEX-100快速提取DNA | 第21页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-43页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-25页 |
| ·实验仪器 | 第25页 |
| ·培养基及试剂配方 | 第25-26页 |
| ·提取香蕉枯萎病菌基因组DNA | 第26-27页 |
| ·Chelex-100法提取Foc4基因组DNA | 第26页 |
| ·CTAB法提取Foc4基因组DNA | 第26-27页 |
| ·提取质粒DNA | 第27-28页 |
| ·Omega试剂盒提取质粒DNA | 第27-28页 |
| ·SDS碱裂解法提取质粒DNA | 第28页 |
| ·制备原生质体 | 第28-29页 |
| ·原生质体转化 | 第29页 |
| ·转化子检测 | 第29-31页 |
| ·转化子菌落表型观察 | 第29页 |
| ·转化子显微观察 | 第29页 |
| ·转化子荧光检测 | 第29-30页 |
| ·转化子PCR检测 | 第30-31页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·转化子PCR检测 | 第31页 |
| ·转化子稳定性分析 | 第31页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌对香蕉假茎的致病实验 | 第31-32页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌孢子悬液的制备 | 第31-32页 |
| ·Foc1&Foc4对巴西蕉假茎的致病性实验 | 第32页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌对巴西蕉根系侵染实验 | 第32页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌(Foc4-GFP)孢子悬液的制备 | 第32页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌(Foc4-GFP)的入侵实验 | 第32页 |
| ·微管蛋白FEM1基因的香蕉枯萎病病原菌敲除载体的构建 | 第32-43页 |
| ·敲除基因的选定 | 第32页 |
| ·设计基因左右臂 | 第32-33页 |
| ·克隆基因左右臂 | 第33-34页 |
| ·PCR产物的回收 | 第34页 |
| ·片段A、片(?)的T载体转化 | 第34-36页 |
| ·PCR产物的连接 | 第34-35页 |
| ·连接产物转化(T-A克隆/T-B克隆) | 第35页 |
| ·阳性菌落鉴定 | 第35-36页 |
| ·构建敲除载体 | 第36-43页 |
| ·片段A连接到载体pCX62上 | 第37-40页 |
| ·片段B连接到载体pCX62-A上 | 第40-43页 |
| 3 实验结果 | 第43-54页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌绿色荧光蛋白基因标记 | 第43-47页 |
| ·野生型致病菌对抗生素Hm B浓度的耐受性实验 | 第44页 |
| ·原生质体检测 | 第44页 |
| ·转化子菌落表型观察 | 第44-46页 |
| ·转化子荧光检测 | 第46页 |
| ·转化子PCR检测 | 第46-47页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌的致病侵染实验 | 第47-48页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌对巴西蕉假茎的致病性实验 | 第47-48页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌(Foc4-GFP)的入侵实验 | 第48页 |
| ·微管蛋白FEM1基因敲除载体的构建 | 第48-51页 |
| ·克隆基因左右臂片段 | 第48-49页 |
| ·T-A、T-B双酶切 | 第49-50页 |
| ·pCX62-A双酶切 | 第50页 |
| ·敲除载体双酶切 | 第50-51页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌REMI遗传转化 | 第51-54页 |
| ·转化子菌落表型观察 | 第51页 |
| ·转化子显微观察 | 第51-52页 |
| ·转化子PCR验证 | 第52-54页 |
| ·阳性转化子插入片段A的PCR扩增 | 第52页 |
| ·阳性转化子插入片段B的PCR扩增 | 第52-53页 |
| ·阳性转化子gene-HJS-011基因的PCR扩增 | 第53页 |
| ·阳性转化子潮霉素基因的PCR扩增 | 第53-54页 |
| 4 分析与讨论 | 第54-61页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌转化GFP基因的意义 | 第54页 |
| ·关于原生质体的制备 | 第54-55页 |
| ·制备原生质体材料的选择 | 第54页 |
| ·关于裂解液的选配 | 第54-55页 |
| ·关于PEG对转化的作用 | 第55页 |
| ·筛选转化子时抗生素浓度的选用 | 第55-56页 |
| ·关于转化子的稳定性 | 第56页 |
| ·关于CHELEX-100法提取真菌DNA | 第56-57页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌不同生理小种对巴西蕉假茎的致病性分析 | 第57页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌的入侵途径 | 第57-58页 |
| ·关于敲除载体的构建 | 第58-60页 |
| ·FEM1基因的功能初探 | 第60-61页 |
| 5 主要结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
