| 中文摘要 | 第4-6页 |
| 英文摘要 | 第6-7页 |
| 第一部分 引言 | 第11-29页 |
| 一、细胞衰老 | 第11-22页 |
| （一）细胞衰老的特点及意义 | 第11-13页 |
| （二）细胞衰老相关的异染色质凝集 | 第13-16页 |
| 1. SAHF简介 | 第13-14页 |
| 2. SAHF的形成过程 | 第14-16页 |
| 3. SAHF形成中的表观遗传修饰 | 第16页 |
| （三）与SAHF形成相关的信号通路 | 第16-18页 |
| （四）细胞衰老的原因 | 第18-21页 |
| （五）SAHF的形成与癌症 | 第21-22页 |
| 二、组蛋白去甲基化酶JMJD3 | 第22-24页 |
| （一）组蛋白去甲基化酶家族简介 | 第22-23页 |
| （二）组蛋白去甲基化酶JMJD3的功能简介 | 第23-24页 |
| 三、RB蛋白及其翻译后修饰的功能及影响 | 第24-27页 |
| （一）蛋白的翻译后修饰 | 第24页 |
| （二）RB蛋白介绍 | 第24-27页 |
| 四、本论文研究的内容及意义 | 第27-29页 |
| （一）立题依据 | 第27页 |
| （二）研究的内容及意义 | 第27-29页 |
| 第二部分 实验材料及方法 | 第29-52页 |
| 一、实验材料 | 第29-31页 |
| （一）蛋白质与抗体 | 第29-30页 |
| （二）哺乳动物细胞系 | 第30页 |
| （三）试剂 | 第30-31页 |
| 二、实验方法 | 第31-52页 |
| Ⅰ.分子生物学实验方法 | 第31-41页 |
| （一）质粒构建 | 第31页 |
| （二）DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| （三）质粒大量制备方法 | 第31-32页 |
| （四）哺乳动物细胞总RNA的提取方法及反转录PCR | 第32-33页 |
| （五）PCR及荧光实时定量PCR | 第33-36页 |
| （六）慢病毒干涉质粒构建 | 第36-37页 |
| （七）Flag亲和层析 | 第37页 |
| （八）GST融合蛋白纯化及GST Pull-down实验 | 第37-39页 |
| （九）体外甲基化-去甲基化实验 | 第39-41页 |
| Ⅱ.细胞生物学实验方法 | 第41-50页 |
| （一）哺乳动物细胞系的培养 | 第41页 |
| （二）PEI转染 | 第41页 |
| （三）逆病毒包装及感染 | 第41-42页 |
| （四）慢病毒包装及感染 | 第42-43页 |
| （五）Western Blotting检测 | 第43-45页 |
| （六）DAPI染色实验 | 第45-46页 |
| （七）免疫荧光检测 | 第46-47页 |
| （八）衰老染色 | 第47页 |
| （九）BrdU掺入 | 第47-48页 |
| （十）细胞质/细胞核蛋白质抽提 | 第48-49页 |
| （十一）蛋白质免疫共沉淀 | 第49-50页 |
| Ⅲ.统计分析 | 第50-52页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第52-72页 |
| 一、干涉JMJD3表达抑制SAHF的形成 | 第52-54页 |
| （一）JMJD3在H-RasV12诱导WI38细胞形成SAHF过程中表达上调 | 第52页 |
| （二）干涉JMJD3逆转H-RasV12诱导WI38细胞衰老 | 第52-53页 |
| （三）沉默JMJD3后H-RasV12诱导WI38细胞形成SAHF比率下降 | 第53-54页 |
| 二、过表达JMJD3诱导SAHF形成 | 第54-57页 |
| （一）外源过表达JMJD3诱导WI38细胞衰老 | 第54-55页 |
| （二）外源过表达JMJD3诱导WI38细胞形成SAHF | 第55-57页 |
| 三、JMJD3与RB蛋白相互作用 | 第57-62页 |
| （一）JMJD3在SAHF形成过程中在细胞质中聚集 | 第57-58页 |
| （二）JMJD3与RB蛋白相互结合 | 第58-59页 |
| （三）JMJD3通过其JmjC结构域与RB蛋白相互作用 | 第59-62页 |
| 1. RB蛋白能结合到JMJD3蛋白的JmjC结构域 | 第59-60页 |
| 2. RB蛋白的 659-840结构域与Jmj C直接结合 | 第60-62页 |
| 四、JMJD3能够对RB蛋白K810位去甲基化 | 第62-67页 |
| （一）JMJD3能够催化RB蛋白去甲基化 | 第62页 |
| （二）JMJD3能够催化Set7/9 介导的RB蛋白甲基化位点去甲基化 | 第62-65页 |
| （三）JMJD3催化RB去甲基化的位点是第810位 | 第65-67页 |
| 五、JMJD3催化RB去甲基化从而抑制RB蛋白的磷酸化 | 第67-72页 |
| （一）JMJD3抑制RB蛋白的磷酸化 | 第67-69页 |
| （二）JMJD3抑制RB与CDK4的结合 | 第69页 |
| （三）RB的去甲基化抑制E2F靶基因的表达，进而促进SAHF的形成 | 第69-72页 |
| 第四部分 讨论 | 第72-77页 |
| 一、SAHF形成中的表观遗传修饰 | 第72-74页 |
| 二、JMJD3诱导细胞形成SAHF不依赖于p16途径 | 第74-75页 |
| 三、RB蛋白甲基化-去甲基化修饰与磷酸化修饰之间的crosstalk | 第75页 |
| 四、RB蛋白的去甲基化影响部分E2F靶基因的表达 | 第75-76页 |
| 五、JMJD3诱导SAHF形成的机制 | 第76-77页 |
| 主要结论和创新点 | 第77-78页 |
| 一、主要结论 | 第77页 |
| 二、主要创新点 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-93页 |
| 附录 | 第93-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 在校期间公开发表论文情况 | 第97页 |
