| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-23页 |
| 1.1 原儿茶酸代谢途径及原儿茶酸3,4-双加氧酶概述 | 第10-17页 |
| 1.1.1 原儿茶酸降解途径 | 第10-11页 |
| 1.1.2 原儿茶酸的环裂解方式 | 第11页 |
| 1.1.3 环裂解双加氧酶简介 | 第11-12页 |
| 1.1.4 原儿茶酸3,4-双加氧酶简介 | 第12页 |
| 1.1.5 原儿茶酸3,4-双加氧酶结构 | 第12页 |
| 1.1.6 不同来源的原儿茶酸3,4-双加氧酶及其特性 | 第12-15页 |
| 1.1.7 原儿茶酸3,4-双加氧酶催化机制 | 第15-16页 |
| 1.1.8 原儿茶酸3,4-双加氧酶的应用 | 第16-17页 |
| 1.2 固定化酶研究进展 | 第17-20页 |
| 1.2.1 固定化酶优点 | 第17页 |
| 1.2.2 固定化酶方法 | 第17-19页 |
| 1.2.3 酶固定化中对载体的要求 | 第19页 |
| 1.2.4 固定化酶的应用 | 第19-20页 |
| 1.3 磁性纳米载体概述 | 第20-22页 |
| 1.3.1 磁性纳米载体特性 | 第20-21页 |
| 1.3.2 磁性纳米材料的应用 | 第21页 |
| 1.3.3 磁性纳米颗粒固定化酶的优点 | 第21-22页 |
| 1.3.4 磁性纳米材料在固定化酶中的具体应用 | 第22页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 第2章 P34O基因的克隆表达及序列分析 | 第23-34页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.2.1 菌株来源 | 第23页 |
| 2.2.2 常用培养基 | 第23-24页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第24页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.3.1 全基因组提取 | 第24页 |
| 2.3.2 P34O的基因克隆 | 第24-26页 |
| 2.3.3 表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.3.4 P34O的分离纯化 | 第27页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第27-33页 |
| 2.4.1 全基因组获得 | 第27-28页 |
| 2.4.2 PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.4.3 重组质粒的构建 | 第29页 |
| 2.4.4 蛋白表达分析 | 第29-31页 |
| 2.4.5 氨基酸序列比对分析 | 第31-32页 |
| 2.4.6 原儿茶酸代谢途径中pca基因簇结构图分析 | 第32-33页 |
| 2.5 本章小结 | 第33-34页 |
| 第3章 重组P34O酶学特性及基因转录水平研究 | 第34-46页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 实验材料 | 第34-35页 |
| 3.2.1 菌株 | 第34页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第34页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第34-35页 |
| 3.3 实验方法 | 第35-39页 |
| 3.3.1 P34O的酶活力测定方法 | 第35-36页 |
| 3.3.2 酶活性验证 | 第36页 |
| 3.3.3 pH对P34O酶活性的影响 | 第36页 |
| 3.3.4 温度对P34O酶活性的影响 | 第36页 |
| 3.3.5 P34O热稳定性的测定 | 第36-37页 |
| 3.3.6 P34O的底物特异性考察 | 第37页 |
| 3.3.7 金属离子及有机溶剂对酶活性的影响 | 第37页 |
| 3.3.8 P34O编码基因转录水平考察 | 第37-39页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第39-45页 |
| 3.4.1 重组P34O活性验证分析 | 第39页 |
| 3.4.2 重组P34O的最适pH及温度 | 第39-40页 |
| 3.4.3 重组P34O的热稳定性 | 第40-41页 |
| 3.4.4 金属离子和有机溶剂对重组P34O酶活力影响 | 第41-42页 |
| 3.4.5 重组P34O的底物特异性 | 第42-43页 |
| 3.4.6 RT-PCR | 第43-45页 |
| 3.5 本章小结 | 第45-46页 |
| 第4章 固定化P34O及酶学特性研究 | 第46-58页 |
| 4.1 引言 | 第46页 |
| 4.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 4.2.1 酶的来源 | 第46页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第46-47页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第47页 |
| 4.3 实验方法 | 第47-50页 |
| 4.3.1 P34O分子量大小测定 | 第47页 |
| 4.3.2 磁性纳米粒子Fe_3O_4氨基修饰的制备 | 第47-48页 |
| 4.3.3 原儿茶酸3,4-双加氧酶的固定化 | 第48页 |
| 4.3.4 磁性纳米颗粒及固定化酶的表征 | 第48-49页 |
| 4.3.5 游离及固定化P34O的酶学性质研究 | 第49-50页 |
| 4.3.6 固定化酶的重复利用性测定 | 第50页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第50-56页 |
| 4.4.1 P34O蛋白分子量大小 | 第50-51页 |
| 4.4.2 材料表征分析 | 第51-53页 |
| 4.4.3 固定化效率及回收率 | 第53页 |
| 4.4.4 游离及固定化P34O的最适条件 | 第53-54页 |
| 4.4.5 游离及固定化P34O的热稳定 | 第54页 |
| 4.4.6 游离及固定化P34O反应动力学参数 | 第54-55页 |
| 4.4.7 金属离子及有机溶剂对游离及固定化P34O的影响 | 第55-56页 |
| 4.4.8 固定化酶的重复利用性 | 第56页 |
| 4.5 本章小结 | 第56-58页 |
| 第5章 总结与展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 附录 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
