| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 第一章 前言 | 第17-33页 |
| 1.1 国内外研究进展 | 第17-30页 |
| 1.1.1 黄瓜花叶病毒 | 第17-21页 |
| 1.1.2 内质网应激与未折叠蛋白反应和细胞程序性死亡 | 第21-22页 |
| 1.1.3 动物病毒诱导的寄主ER stress相关的UPR信号通路 | 第22-24页 |
| 1.1.4 非生物因素诱导的拟南芥ER stress应答信号 | 第24-26页 |
| 1.1.5 植物病毒侵染引起ER stress应答信号 | 第26-29页 |
| 1.1.6 问题与展望 | 第29-30页 |
| 1.2 研究目的和意义 | 第30页 |
| 1.2.1 研究目的 | 第30页 |
| 1.2.2 研究意义 | 第30页 |
| 1.3 研究内容和方法 | 第30-33页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第30-31页 |
| 1.3.2 主要试验技术和技术路线 | 第31-33页 |
| 第二章 烟草抗CMV资源筛选及CMV侵染烟草悬浮细胞 | 第33-49页 |
| 2.1 试验材料 | 第33页 |
| 2.1.1 供试植物 | 第33页 |
| 2.1.2 供试病毒 | 第33页 |
| 2.2 试验方法 | 第33-38页 |
| 2.2.1 CMV-IB毒源纯化和培养 | 第33页 |
| 2.2.2 CMV-IB抗性筛选 | 第33-35页 |
| 2.2.3 CMV-IB侵染烟草悬浮细胞BY-2 | 第35-38页 |
| 2.3 结果与分析 | 第38-47页 |
| 2.3.1 试验烟草品种对CMV-IB的抗性表现 | 第38-42页 |
| 2.3.2 CMV-IB提纯及其侵染力 | 第42页 |
| 2.3.3 CMV-IB侵染促进悬浮细胞BY-2凋亡 | 第42-47页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第47-49页 |
| 2.4.1 烟草感染CMV-IB的症状 | 第47页 |
| 2.4.2 CMV抗性资源 | 第47-48页 |
| 2.4.3 悬浮细胞和原生质体侵染体系的应用 | 第48-49页 |
| 第三章 CMV侵染诱导烟草内质网应激 | 第49-70页 |
| 3.1 试验材料 | 第49页 |
| 3.1.1 供试烟草和病毒 | 第49页 |
| 3.1.2 载体和质粒 | 第49页 |
| 3.2 试验方法 | 第49-53页 |
| 3.2.1 试验处理 | 第49-50页 |
| 3.2.2 ER stress相关基因检测 | 第50-51页 |
| 3.2.3 电镜样品制备及观察 | 第51-52页 |
| 3.2.4 ER标记及形态观察 | 第52-53页 |
| 3.3 结果与分析 | 第53-67页 |
| 3.3.1 CMV-IB侵染三生烟和本氏烟的症状 | 第53-54页 |
| 3.3.2 CMV CP和ER stress相关基因的表达量 | 第54-58页 |
| 3.3.3 CMV-IB侵染烟草的细胞病变 | 第58-65页 |
| 3.3.4 CMV-IB侵染烟草诱发ER形态变化 | 第65-67页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第67-70页 |
| 3.4.1 CMV-IB系统侵染三生烟和本氏烟 | 第67页 |
| 3.4.2 病毒诱发寄主ER膜结构重排和增生 | 第67-68页 |
| 3.4.3 病毒激活寄主ER stress相关基因 | 第68页 |
| 3.4.4 CMV侵染烟草导致细胞器降解和自噬结构增多 | 第68-70页 |
| 第四章 UPR调控因子NbbZIP28的研究 | 第70-95页 |
| 4.1 试验材料 | 第70页 |
| 4.1.1 供试烟草与病毒 | 第70页 |
| 4.1.2 载体与质粒 | 第70页 |
| 4.2 试验方法 | 第70-75页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第70-72页 |
| 4.2.2 3'RACE、同源克隆及序列分析 | 第72-73页 |
| 4.2.3 融合蛋白构建及瞬时转染 | 第73-74页 |
| 4.2.4 VIGS基因沉默 | 第74页 |
| 4.2.5 接种CMV、TMV和TMV-GFP | 第74-75页 |
| 4.2.6 qRT-PCR检测基因的表达量 | 第75页 |
| 4.3 结果与分析 | 第75-91页 |
| 4.3.1 NbbZIP28基因鉴定 | 第75-80页 |
| 4.3.2 NbbZIP28亚细胞定位 | 第80-82页 |
| 4.3.3 病毒侵染诱导NbbZIP28表达上调 | 第82页 |
| 4.3.4 NbbZIP28沉默导致寄主对病毒的敏感性上升 | 第82-86页 |
| 4.3.5 NbbZIP28沉默抑制病毒诱导的UPR基因上调表达 | 第86-91页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第91-95页 |
| 4.4.1 植物ER膜转录因子NbbZIP28的结构特征 | 第91页 |
| 4.4.2 生物和非生物胁迫诱导植物UPR信号 | 第91-92页 |
| 4.4.3 内质网膜转录因子NbbZIP28的功能 | 第92页 |
| 4.4.4 NbbZIP60补充UPR信号NbbZIP28 | 第92-93页 |
| 4.4.5 NbbZIP28作用机理 | 第93页 |
| 4.4.6 内参基因的选择 | 第93-95页 |
| 第五章 NbbZIP28突变体创建及其对病毒的敏感性 | 第95-111页 |
| 5.1 试验材料 | 第95页 |
| 5.1.1 供试烟草和病毒 | 第95页 |
| 5.1.2 载体、质粒和细胞 | 第95页 |
| 5.2 试验方法 | 第95-99页 |
| 5.2.1 Crispr-cas9基因编辑和烟草遗传转染 | 第95-98页 |
| 5.2.2 NbbZIP28突变体对病毒的敏感性及耐盐、耐旱性检测 | 第98-99页 |
| 5.3 结果与分析 | 第99-108页 |
| 5.3.1 Crispr-Cas9基因编辑突变NbbZIP28 | 第99-100页 |
| 5.3.2 NbbZIP28突变体的性状 | 第100-101页 |
| 5.3.3 突变体mNbbZIP28的生物学性状 | 第101-102页 |
| 5.3.4 突变体mNbbZIP28对病毒的敏感性上升 | 第102-105页 |
| 5.3.5 突变体mNbbZIP28的耐盐和耐旱检测 | 第105-108页 |
| 5.4 结论与讨论 | 第108-111页 |
| 5.4.1 CRISPR-Cas9基因编辑技术 | 第108-109页 |
| 5.4.2 突变体对病毒的敏感性 | 第109页 |
| 5.4.3 突变体对盐害和干旱胁迫的敏感性 | 第109-110页 |
| 5.4.4 bZIP转录因子与作物抗逆 | 第110-111页 |
| 第六章 全文结论与创新点 | 第111-112页 |
| 6.1 结论 | 第111页 |
| 6.1.1 CMV-IB侵染诱导烟草内质网应激 | 第111页 |
| 6.1.2 NbbZIP28通过促进UPR信号提高寄主抗性而延缓病毒侵染 | 第111页 |
| 6.2 创新点 | 第111-112页 |
| 6.2.1 明确CMV-IB诱导烟草内质网应激 | 第111页 |
| 6.2.2 明确UPR信号NbbZIP28早期延缓病毒侵染 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-118页 |
| 附录 | 第118-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 攻读学位论文期间发表文章 | 第121-122页 |
| 论文图表统计 | 第122-123页 |
