| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 1.前言 | 第11-19页 |
| 1.1 百合体细胞胚发生的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.1.1 胚性愈伤组织与非胚性愈伤组织 | 第11-12页 |
| 1.1.2 影响体细胞胚发生的因素 | 第12-13页 |
| 1.2 miRNA对植物体细胞胚发生的调控作用 | 第13-18页 |
| 1.2.1 miRNA的发现 | 第13-14页 |
| 1.2.2 miRNA的作用机制 | 第14页 |
| 1.2.3 miRNA对植物生长发育的调控 | 第14-16页 |
| 1.2.4 miRNA对植物胚胎发育的调控 | 第16页 |
| 1.2.5 miR166及其靶基因对植物生长发育的调控 | 第16-18页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 2.lpu-miR166a/b/c和lda-miR166a/b/c的克隆 | 第19-25页 |
| 2.1 材料与方法 | 第19-22页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 RNA的提取 | 第19页 |
| 2.1.3 miR166的特异茎环反转录 | 第19-20页 |
| 2.1.4 lpu-miR166a/b/c和lda-miR166a/b/c的PCR扩增反应 | 第20-21页 |
| 2.1.5 PCR扩增产物的纯化 | 第21页 |
| 2.1.6 连接、转化目的片段并测序 | 第21-22页 |
| 2.2 结果与分析 | 第22-23页 |
| 2.2.1 细叶与兰州百合总RNA提取结果 | 第22-23页 |
| 2.2.2 lpu-miR166a/b/c和lda-miR166a/b/c的克隆 | 第23页 |
| 2.3 讨论 | 第23-25页 |
| 3.miR166靶基因作用位点的鉴定 | 第25-32页 |
| 3.1 材料方法 | 第25-28页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第25页 |
| 3.1.2 总RNA提取与mRNA的纯化 | 第25页 |
| 3.1.3 cDNA第一链的合成 | 第25-26页 |
| 3.1.4 RLM-5'RACE扩增 | 第26-28页 |
| 3.1.5 PCR扩增产物的纯化、连接及转化 | 第28页 |
| 3.1.6 测序结果的比对分析 | 第28页 |
| 3.2 结果与分析 | 第28-29页 |
| 3.2.1 RLM-5'RACE扩增产物分析 | 第28-29页 |
| 3.2.2 miR166剪切位点序列分析 | 第29页 |
| 3.3 讨论 | 第29-32页 |
| 4.百合体胚发生过程中miR166及其靶基因表达模式分析 | 第32-40页 |
| 4.1 材料与方法 | 第32-34页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第32页 |
| 4.1.2 RNA提取 | 第32页 |
| 4.1.3 cDNA合成 | 第32页 |
| 4.1.4 miR166及其靶基因qRT-PCR引物设计 | 第32-33页 |
| 4.1.5 miR166及其靶基因qRT-PCR分析 | 第33-34页 |
| 4.1.6 数据分析 | 第34页 |
| 4.2 结果分析 | 第34-37页 |
| 4.2.1 引物特异性分析 | 第34-35页 |
| 4.2.2 miR166及其靶基因在百合体胚发育不同时期的表达模式分析 | 第35-37页 |
| 4.3 讨论 | 第37-40页 |
| 总结 | 第40-41页 |
| 主要创新点 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-49页 |
| 附录 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
