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陆地棉GhSPO11-3基因的克隆与功能分析

摘要第5-7页
Abstract第7-8页
1 文献综述第12-21页
    1.1 棉花耐盐性研究概况第12-13页
        1.1.1 盐胁迫对棉花影响的范围第12页
        1.1.2 盐胁迫对棉花生长的影响第12页
        1.1.3 盐胁迫制约棉花生长发育的机制第12-13页
    1.2 SPO11-3 基因的研究进展第13-17页
        1.2.1 SPO11-3 基因结构第13-14页
        1.2.2 SPO11-3 基因的生物学功能第14-16页
        1.2.3 SPO11-3 基因可能的的胁迫应答机理第16-17页
    1.3 核内复制第17-19页
        1.3.1 核内复制的研究进展第17-18页
        1.3.2 核内复制与植物抗逆性第18-19页
    1.4 病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)分子机制及应用现状第19-20页
    1.5 本研究的目的及意义第20-21页
2 GhSPO11-3 基因的分子克隆与鉴定第21-36页
    2.1 实验材料第21-23页
        2.1.1 植物材料第21页
        2.1.2 菌株、质粒和载体第21页
        2.1.3 溶液配制第21-22页
        2.1.4 常用试剂及酶第22页
        2.1.5 引物及测序第22-23页
    2.2 实验方法第23-29页
        2.2.1 棉花基因组DNA的提取及检测第23页
        2.2.2 克隆棉花GhSPO11-3 基因第23-26页
        2.2.3 GhSPO11-3 氨基酸同源序列比对分析以及进化树的构建第26页
        2.2.4 棉花不同组织RNA的提取及反转录第26-27页
        2.2.5 GhSPO11-3 基因的组织特征表达分析第27-28页
        2.2.6 GhSPO11-3 蛋白的亚细胞定位第28-29页
    2.3 结果分析第29-34页
        2.3.1 棉花GhSPO11-3 基因的克隆第29-30页
        2.3.2 GhSPO11-3 蛋白同源序列比对分析第30-31页
        2.3.3 GhSPO11-3 的氨基酸序列进化树的构建第31-32页
        2.3.4 棉花GhSPO11-3 基因的组织表达特征分析第32-33页
        2.3.5 棉花GhSPO11-3 蛋白的亚细胞定位第33-34页
    2.4 讨论第34-36页
3 农杆菌介导的VIGS沉默GhSPO11-3 基因第36-46页
    3.1 实验材料第36-37页
        3.1.1 植物材料第36页
        3.1.2 菌株、质粒第36页
        3.1.3 常用试剂及酶第36页
        3.1.4 抗生素,培养基以及重悬液的配制第36-37页
    3.2 实验方法第37-40页
        3.2.1 含有目的基因片段的沉默载体TRV:SPO11-3 构建第37-38页
        3.2.2 棉花VIGS体系的构建第38页
        3.2.3 转化植株GhSPO11-3 基因表达水平的检测第38-39页
        3.2.4 转化植株的倍性分析第39页
        3.2.5 转化植株的细胞学分析第39-40页
    3.3 结果分析第40-44页
        3.3.1 病毒诱导基因沉默载体的构建第40-41页
        3.3.2 棉花GhSPO11-3 基因沉默植株的获得第41页
        3.3.3 棉花GhSPO11-3 基因沉默植株表型分析第41-42页
        3.3.4 目标基因表达水平的检测第42-43页
        3.3.5 流式细胞仪分析第43-44页
        3.3.6 细胞学分析第44页
    3.4 讨论第44-46页
4 沉默GhSPO11-3 基因的陆地棉耐盐性分析第46-53页
    4.1 材料第46页
        4.1.1 植物材料第46页
        4.1.2 常用试剂第46页
    4.2 实验方法第46-48页
        4.2.1 沉默GhSPO11-3 基因的陆地棉盐胁迫处理第46页
        4.2.2 棉花叶片中叶绿素含量的测定第46-47页
        4.2.3 棉花叶片中脯氨酸含量的测定第47页
        4.2.4 棉花叶片中丙二醛含量的测定第47-48页
        4.2.5 耐盐相关基因的表达量分析第48页
    4.3 结果分析第48-51页
        4.3.1 盐胁迫对GhSPO11-3 基因沉默的棉花表型的影响第48-49页
        4.3.2 盐胁迫对棉花叶绿素含量的影响第49页
        4.3.3 盐胁迫对棉花脯氨酸含量的影响第49页
        4.3.4 盐胁迫对棉花丙二醛含量的影响第49-50页
        4.3.5 盐胁迫对胁迫响应基因表达量的影响第50-51页
    4.4 讨论第51-53页
5 结论与展望第53-55页
参考文献第55-61页
附录一 本试验所用引物列表第61-62页
附录二 实验所用主要仪器第62-63页
个人简历第63页
硕士期间发表论文第63-64页
致谢第64页

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