| 中文摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第10-16页 |
| 1.1 正单链RNA病毒基因组复制 | 第10-11页 |
| 1.2 RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp） | 第11-12页 |
| 1.3 蛋白表达 | 第12-14页 |
| 1.4 烟草丛顶病毒 | 第14-15页 |
| 1.5 目的和意义 | 第15-16页 |
| 2 材料和方法 | 第16-27页 |
| 2.1 材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 质粒，菌株，引物 | 第16页 |
| 2.1.2 分子生物学试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 方法 | 第17-27页 |
| 2.2.1 原核表达载体的构建 | 第17-22页 |
| 2.2.1.1 聚合酶链式反应（PCR） | 第17页 |
| 2.2.1.2 重叠PCR | 第17-18页 |
| 2.2.1.3 核酸的胶回收 | 第18-19页 |
| 2.2.1.4 质粒或片段的酶切 | 第19页 |
| 2.2.1.5 核酸的沉淀及浓缩 | 第19页 |
| 2.2.1.6 连接反应 | 第19-20页 |
| 2.2.1.7 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第20-21页 |
| 2.2.1.8 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第21页 |
| 2.2.1.9 菌落PCR筛选重组质粒 | 第21页 |
| 2.2.1.10 碱裂解法提取小量质粒 | 第21-22页 |
| 2.2.2 蛋白的原核表达及纯化 | 第22-24页 |
| 2.2.2.1 原核表达 | 第22-23页 |
| 2.2.2.2 蛋白的可溶性检测 | 第23页 |
| 2.2.2.3 可溶性蛋白的亲和柱层析纯化（MBP标签） | 第23-24页 |
| 2.2.3 RdRp介导的体外复制体系 | 第24-27页 |
| 2.2.3.1 体外转录制备RNA | 第24-25页 |
| 2.2.3.2 RdRp介导的体外复制实验 | 第25-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-35页 |
| 3.1 TBTV RdRp介导的体外复制体系的建立 | 第27-29页 |
| 3.1.1 TBTV RdRp原核表达的条件优化 | 第27-28页 |
| 3.1.2 TBTV RdRp可溶性蛋白的亲和柱层析纯化（MBP标签） | 第28页 |
| 3.1.3 体外转录制备TBTV的不同RNA片段 | 第28-29页 |
| 3.1.4 TBTV RdRp介导的体外复制体系 | 第29页 |
| 3.2 TBTV 3'末端的结构元件的突变及对复制效率的影响 | 第29-32页 |
| 3.2.1 TBTV 3'末端的结构及所构建的突变 | 第30-31页 |
| 3.2.2 TBTV 3'末端的突变对体外复制效率的效应 | 第31-32页 |
| 3.3 TBTV其他分离物RdRp原核表达及体外复制活性分析 | 第32-35页 |
| 3.3.1 TBTV其他分离物的RdRp原核表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.3.2 TBTV其他分离物的RdRp原核表达 | 第33页 |
| 3.3.3 TBTV不同分离物RdRp的体外复制 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 4.1 关于原核表达与蛋白纯化 | 第35-36页 |
| 4.2 关于TBTV RdRp介导的基因组复制的研究体系的创建 | 第36-37页 |
| 5 结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-43页 |
| 附表 1.引物列表 | 第43-44页 |
| 附表 2.质粒列表 | 第44-46页 |
| 附表 3. pMal-c2x质粒载体 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第48页 |
