| 中文摘要 | 第13-14页 |
| ABSTRACT | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-26页 |
| 1.1. 实体肿瘤的组成 | 第16页 |
| 1.2 肿瘤间质中的癌相关成纤维细胞 | 第16-18页 |
| 1.2.1 癌相关成纤维细胞的来源及形态、生物学特征 | 第16-17页 |
| 1.2.2 癌相关成纤维细胞与肿瘤的发生和发展 | 第17-18页 |
| 1.3 间充质干细胞与肿瘤 | 第18-23页 |
| 1.3.1 间充质干细胞的基本特点 | 第18-19页 |
| 1.3.2 间充质干细胞的肿瘤趋向性 | 第19-20页 |
| 1.3.3 间充质干细胞促进肿瘤生长 | 第20-21页 |
| 1.3.4 间充质干细胞可以抑制某些肿瘤生长 | 第21页 |
| 1.3.5 间充质干细胞可转化为恶性肿瘤细胞 | 第21-22页 |
| 1.3.6 间充质干细胞在肿瘤治疗过程中的作用 | 第22-23页 |
| 1.4 GRP78与肿瘤 | 第23-25页 |
| 1.4.1 GRP78的结构与功能 | 第23页 |
| 1.4.2 GRP78与肿瘤发生和发展 | 第23-24页 |
| 1.4.3 GRP78在肿瘤治疗中的作用 | 第24-25页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 结肠癌细胞分泌型GRP78对骨髓间充质干细胞向癌相关成纤维细胞分化的影响 | 第26-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.2 细胞株 | 第27页 |
| 2.1.3 试剂及抗体 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-29页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第28页 |
| 2.2.2 细胞的冻存及复苏 | 第28页 |
| 2.2.3 结肠癌细胞条件培养基的获取 | 第28页 |
| 2.2.4 Western blotting检测结肠癌细胞条件培养基对HBMSCs分化的影响 | 第28页 |
| 2.2.5 Western blotting检测结肠癌细胞分泌型GRP78表达 | 第28-29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-30页 |
| 2.3.1 结肠癌细胞条件培养基诱导BMSCs向CAFs分化 | 第29页 |
| 2.3.2 检测结肠癌细胞分泌型GRP78的表达 | 第29-30页 |
| 2.3.3 结肠癌细胞分泌型GRP78对BMSCs向CAFs分化的影响 | 第30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 GST-GRP78融合蛋白对骨髓间充质干细胞向癌相关成纤维细胞分化的影响 | 第31-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 菌株、质粒与实验动物 | 第31页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第31页 |
| 3.1.3 试剂 | 第31-32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-34页 |
| 3.2.1 大肠杆菌BL21感受态细胞制备 | 第32页 |
| 3.2.2 质粒转化 | 第32-33页 |
| 3.2.3 pGEX-4T-2-GRP78的诱导表达 | 第33页 |
| 3.2.4 GST-GRP78融合蛋白的纯化 | 第33页 |
| 3.2.5 大鼠骨髓间充质干细胞分离与培养 | 第33页 |
| 3.2.6 细胞总RNA的提取及反转录 | 第33-34页 |
| 3.2.7 荧光定量PCR | 第34页 |
| 3.2.8 统计学分析 | 第34页 |
| 3.3 实验结果 | 第34-37页 |
| 3.3.1 融合蛋白GST-GRP78的表达 | 第34-35页 |
| 3.3.2 GST-GRP78促进BMMSCs向CAFs分化 | 第35-36页 |
| 3.3.3 GST-GRP78促进HBMMSCs向CAFs分化 | 第36-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 分泌型GRP78促进骨髓间充质干细胞向癌相关成纤维细胞分化的分子机制研究 | 第39-43页 |
| 4.1 实验材料 | 第40页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第40页 |
| 4.1.2 试剂及抗体 | 第40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40页 |
| 4.2.1 蛋白提取和western blotting | 第40页 |
| 4.2.2 SB431542抑制细胞TGF-β信号通路模型建立 | 第40页 |
| 4.2.3 荧光定量PCR | 第40页 |
| 4.2.4 统计学分析 | 第40页 |
| 4.3 实验结果 | 第40-42页 |
| 4.3.1 分泌型GRP78上调HBMSCs的P-Smad2/3表达水平 | 第40-41页 |
| 4.3.2 分泌型GRP78通过激活TGFβ/Smad信号通路诱导HBMSCs分化 | 第41-42页 |
| 4.4 讨论 | 第42-43页 |
| 第五章 结肠癌细胞通过细胞直接接触作用诱导骨髓间充质干细胞向癌相关成纤维细胞分化的研究 | 第43-47页 |
| 5.1 实验材料 | 第43页 |
| 5.1.1 质粒与细胞株 | 第43页 |
| 5.1.2 试剂 | 第43页 |
| 5.1.3 仪器 | 第43页 |
| 5.2 实验方法 | 第43-44页 |
| 5.2.1 细胞培养 | 第43页 |
| 5.2.2 GFP-SW480细胞稳定株构建 | 第43-44页 |
| 5.2.3 免疫荧光染色检测共培养体系中BMSCs的α-SMA表达水平 | 第44页 |
| 5.3 实验结果 | 第44-46页 |
| 5.3.1 结肠癌细胞通过细胞直接接触作用诱导HBMSCs向CAFs分化 | 第44-45页 |
| 5.3.2 结肠癌细胞通过细胞直接接触作用诱导BMMSCs向CAFs分化 | 第45-46页 |
| 5.4 讨论 | 第46-47页 |
| 第六章 Jagged1-Notch信号通路介导细胞接触诱导的骨髓间充质干细胞向癌相关成纤维细胞分化 | 第47-52页 |
| 6.1 实验材料 | 第47页 |
| 6.1.1 质粒与细胞株 | 第47页 |
| 6.1.2 主要试剂及抗体 | 第47页 |
| 6.2 实验方法 | 第47-48页 |
| 6.2.1 细胞流式仪分析共培养组中各细胞组分比例 | 第47页 |
| 6.2.2 Jagged1、DeIta1基因敲除DLD1稳定株构建 | 第47-48页 |
| 6.2.3 统计学分析 | 第48页 |
| 6.3 实验结果 | 第48-51页 |
| 6.3.1 Notch和Smad依赖的信号通路在共培养体系中被激活 | 第48-49页 |
| 6.3.2 DAPT抑制细胞接触诱导的BMSCs向CAFs分化 | 第49-50页 |
| 6.3.3 敲减结肠癌细胞Notch配体Jagged1抑制细胞接触诱导的BMSCs向CAFs分化 | 第50-51页 |
| 6.4 讨论 | 第51-52页 |
| 第七章 Notch信号通过下游TGF-β/Smad途径诱导骨髓间充干细胞向癌相关成纤维细胞分化 | 第52-57页 |
| 7.1 实验材料 | 第52页 |
| 7.1.1 细胞株 | 第52页 |
| 7.1.2 主要试剂及抗体 | 第52页 |
| 7.2 实验方法 | 第52页 |
| 7.2.1 蛋白提取和western blotting | 第52页 |
| 7.2.2 荧光定量PCR | 第52页 |
| 7.2.3 免疫荧光染色 | 第52页 |
| 7.2.4 统计学分析 | 第52页 |
| 7.3 实验结果 | 第52-55页 |
| 7.3.1 共培养体系中TGF-β表达水平上调 | 第52-53页 |
| 7.3.2 SB431542抑制BMSCs向CAFs分化 | 第53-54页 |
| 7.3.3 Notch通过TGF-β1-Smad信号通路诱导BMSCs向CAFs分化 | 第54-55页 |
| 7.4 讨论 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-69页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 个人简况及联系方式 | 第72-73页 |
| 承诺书 | 第73-74页 |
