| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第17-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-27页 |
| 1.1 鸭疫里默氏杆菌的研究进展 | 第18页 |
| 1.1.1 结构形态 | 第18页 |
| 1.2 流行病学 | 第18-19页 |
| 1.2.1 发现及流行情况 | 第18页 |
| 1.2.2 易感宿主 | 第18-19页 |
| 1.2.3 传播途径 | 第19页 |
| 1.3 生化特性 | 第19页 |
| 1.4 全基因组序列测定 | 第19-20页 |
| 1.5 致病机制 | 第20-21页 |
| 1.5.1 外膜蛋白OmpA | 第20页 |
| 1.5.2 明胶酶 | 第20页 |
| 1.5.3 脂多糖O抗原 | 第20-21页 |
| 1.5.4 其它毒力因子 | 第21页 |
| 1.6 疫苗的开发 | 第21-22页 |
| 1.6.1 灭活疫苗 | 第21页 |
| 1.6.2 弱毒疫苗 | 第21-22页 |
| 1.6.3 基因工程疫苗 | 第22页 |
| 1.7 革兰氏阴性菌LPS的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.7.1 脂多糖的结构 | 第23页 |
| 1.7.2 类脂A | 第23页 |
| 1.7.3 核心多糖 | 第23-24页 |
| 1.7.4 O-抗原 | 第24页 |
| 1.8 脂多糖的作用机制 | 第24-25页 |
| 1.9 脂多糖的粗提法 | 第25-26页 |
| 1.9.1 超声波提取 | 第26页 |
| 1.9.2 煮沸提取 | 第26页 |
| 1.9.3 改良热酚水法 | 第26页 |
| 1.10展望 | 第26-27页 |
| 第二章 鸭疫里默氏杆菌脂多糖单克隆抗体的制备 | 第27-35页 |
| 2.1 材料和方法 | 第27-28页 |
| 2.1.1 细胞系、菌株及实验动物 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第27页 |
| 2.1.4 主要缓冲液及试剂配制 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-30页 |
| 2.2.1 菌株培养 | 第28页 |
| 2.2.2 LPS的提取、纯化及鉴定 | 第28页 |
| 2.2.3 抗原制备及动物免疫 | 第28页 |
| 2.2.4 细胞融合筛选、阳性细胞的亚克隆以及稳定性检测 | 第28-29页 |
| 2.2.5 腹水制备以及效价测定 | 第29页 |
| 2.2.6 Ig类及亚类测定 | 第29页 |
| 2.2.7 单克隆抗体的生物学特性研究 | 第29-30页 |
| 2.3 结果 | 第30-33页 |
| 2.3.1 LPS的提取及鉴定 | 第30页 |
| 2.3.2 阳性杂交瘤细胞筛选结果 | 第30-31页 |
| 2.3.3 单抗腹水的效价测定 | 第31页 |
| 2.3.4 单克隆抗体Ig类及亚类测定 | 第31页 |
| 2.3.5 单克隆抗体与RA LPS的反应 | 第31-32页 |
| 2.3.6 单克隆抗体的特异性鉴定 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 鸭疫里默氏杆菌脂多糖突变株CH3?M949_1556鉴定及生物学特性分析 | 第35-51页 |
| 3.1 材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 菌株、实验动物及细胞系 | 第35页 |
| 3.1.2 主要仪器设备及试剂 | 第35页 |
| 3.1.3 主要培养基及缓冲液配制 | 第35页 |
| 3.1.4 抗生素及使用浓度 | 第35-36页 |
| 3.1.5 引物 | 第36页 |
| 3.2 方法 | 第36-42页 |
| 3.2.1 间接ELISA法筛选LPS突变株 | 第36-37页 |
| 3.2.2 Southern blot分析Tn4351 位点的个数 | 第37-38页 |
| 3.2.3 Genome Walking鉴定突变基因 | 第38-39页 |
| 3.2.4 RT-PCR鉴定CH3?M949_1556 突变株 | 第39-40页 |
| 3.2.5 测定CH3?M949_1556 生长曲线 | 第40页 |
| 3.2.6 测定LD_50和血液载菌量 | 第40页 |
| 3.2.7 测定鸭疫里默氏杆菌CH3、CH3?M949_1556 对血清的抵抗力 | 第40-41页 |
| 3.2.8 鸭疫里默氏杆菌CH3、CH3?M949_1556 对Vero细胞黏附、入侵能力的测定 | 第41页 |
| 3.2.9 Western blotting比较CH3 和CH3?M949_1556 LPS的抗原差异 | 第41-42页 |
| 3.2.10 灭活油乳剂疫苗的交叉保护试验 | 第42页 |
| 3.3 结果 | 第42-48页 |
| 3.3.1 LPS突变株筛选结果 | 第42页 |
| 3.3.2 Southern Blot结果 | 第42-43页 |
| 3.3.3 Genome Walking | 第43-44页 |
| 3.3.4 测序及序列分析结果 | 第44-45页 |
| 3.3.5 RT-PCR结果 | 第45页 |
| 3.3.6 生长曲线测定 | 第45页 |
| 3.3.7 毒力测定 | 第45-46页 |
| 3.3.8 血清杀菌试验 | 第46-47页 |
| 3.3.9 粘附、入侵试验 | 第47页 |
| 3.3.10 Western blot结果 | 第47-48页 |
| 3.3.11 交叉保护力的测定 | 第48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-51页 |
| 3.4.1 CH3?M949_1556 的生物学特性研究 | 第48-49页 |
| 3.4.2 免疫保护效果的评估 | 第49-51页 |
| 第四章 鸭疫里默氏杆菌脂多糖突变株RA-M1 的鉴定及生物学特性分析 | 第51-64页 |
| 4.1 材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 菌株、实验动物及细胞系 | 第51页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第51页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第51页 |
| 4.1.4 PCR引物 | 第51-52页 |
| 4.2 方法 | 第52-55页 |
| 4.2.1 Southern Blot鉴定转座子插入位点个数 | 第52页 |
| 4.2.2 Genome Walking鉴定转座子插入位点 | 第52页 |
| 4.2.3 RT-PCR检测转座子插入对目的基因上、下游基因的影响 | 第52页 |
| 4.2.4 RA-M1 生长曲线的测定 | 第52-53页 |
| 4.2.5 Western blotting比较CH3 和RA-M1 LPS的抗原差异 | 第53页 |
| 4.2.6 基因分布检测 | 第53页 |
| 4.2.7 LD50测定 | 第53页 |
| 4.2.8 血清杀菌试验 | 第53页 |
| 4.2.9 鸭疫里默氏杆菌CH3、RA-M1 对Vero细胞黏附、入侵能力的测定 | 第53-54页 |
| 4.2.10 鸭疫里默氏杆菌RA-M1 灭活油乳剂疫苗的制备以及动物免疫 | 第54页 |
| 4.2.11 抗体效价的检测 | 第54页 |
| 4.2.12 细胞因子 | 第54-55页 |
| 4.3 结果 | 第55-62页 |
| 4.3.1 Southern Blot | 第55页 |
| 4.3.2 序列测定及分析结果 | 第55页 |
| 4.3.3 RT-PCR结果 | 第55页 |
| 4.3.4 生长曲线测定 | 第55-56页 |
| 4.3.5 Western blot结果 | 第56页 |
| 4.3.6 基因分布测定结果 | 第56-57页 |
| 4.3.7 LD50的测定结果 | 第57-58页 |
| 4.3.8 血清杀菌试验 | 第58页 |
| 4.3.9 对Vero细胞的粘附、入侵试验 | 第58-59页 |
| 4.3.10 交叉保护力测定 | 第59-60页 |
| 4.3.11 病理变化观察 | 第60-61页 |
| 4.3.12 抗体效价监测 | 第61页 |
| 4.3.13 细胞因子检测 | 第61-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-64页 |
| 4.4.1 突变株RA-M1 的鉴定及其生物学特性研究 | 第62-63页 |
| 4.4.2 免疫保护效果的评估 | 第63-64页 |
| 第五章 全文结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简历 | 第71页 |
