| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 常用缩写词中英文对照表 | 第12-15页 |
| 前言 | 第15-19页 |
| 第一部分 肿瘤细胞系突变基因位点的鉴定 | 第19-28页 |
| 1 材料与方法 | 第19-23页 |
| 1.1 材料 | 第19-20页 |
| 1.1.1 主要实验试剂 | 第19页 |
| 1.1.2 实验仪器 | 第19页 |
| 1.1.3 主要溶液的配置 | 第19-20页 |
| 1.2 方法 | 第20-23页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第20页 |
| 1.2.2 细胞的传代、冻存与复苏 | 第20页 |
| 1.2.3 基因组提取步骤 | 第20页 |
| 1.2.4 进行PCR扩增试验 | 第20-22页 |
| 1.2.5 DNA回收试剂盒步骤 | 第22页 |
| 1.2.6 PCR后的DNA平末端加腺嘌呤核苷酸 | 第22页 |
| 1.2.7 普通DNA纯化试剂盒步骤 | 第22页 |
| 1.2.8 T载体连接实验步骤 | 第22页 |
| 1.2.9 质粒转化 | 第22页 |
| 1.2.10 摇菌 | 第22页 |
| 1.2.11 质粒小提试剂盒步骤 | 第22-23页 |
| 1.2.12 质粒测序 | 第23页 |
| 2 结果 | 第23-26页 |
| 2.1 PCR扩增突肿瘤细胞基因组突变部位 | 第23-24页 |
| 2.2 测序结果 | 第24-26页 |
| 3 讨论 | 第26-27页 |
| 4 结论 | 第27-28页 |
| 第二部分 NgAgo-gDNA系统在哺乳动物中基因编辑效果的验证 | 第28-46页 |
| 1.材料与方法 | 第28-35页 |
| 1.1 主要材料 | 第28-29页 |
| 1.1.1 实验试剂 | 第28页 |
| 1.1.2 实验仪器 | 第28页 |
| 1.1.3 主要溶液的配置 | 第28-29页 |
| 1.2 方法 | 第29-35页 |
| 1.2.1 细胞培养：同第一部分 | 第29页 |
| 1.2.2 细胞传代、复苏及冻存：同第一部分 | 第29页 |
| 1.2.3 载体的构建 | 第29-30页 |
| 1.2.4 目的质粒、gDNA以及NgAgo共转染到 293FT细胞中 | 第30-31页 |
| 1.2.5 Western blot | 第31页 |
| 1.2.6 流式分选 | 第31-32页 |
| 1.2.7 T7E1酶切法检测突变体及靶向部位的测序 | 第32页 |
| 1.2.8 Real-time PCR实时定量检测EGFP在mRNA水平的表达 | 第32-35页 |
| 2 结果 | 第35-44页 |
| 2.1.初次验证NgAgo-gDNA系统在 293FT细胞中的基因编辑效果 | 第35-38页 |
| 2.1.1 致癌突变基因与EGFP共表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.1.2 靶向突变部位或EGFP后，流式检测EGFP荧光表达率 | 第36-37页 |
| 2.1.3 Western Blot检测NgAgo蛋白表达 | 第37-38页 |
| 2.2 探究在不同条件下NgAgo-gDNA系统在 293FT细胞中的基因编辑效果 | 第38-40页 |
| 2.2.1 首先我们探究不同效靶比条件下的基因编辑效果 | 第38页 |
| 2.2.2 然后我们探究不同血清浓度（10%、5%、2.5%）条件下的基因编辑效果 | 第38-39页 |
| 2.2.3 突变部位的检测 | 第39-40页 |
| 2.3 NgAgo-gDNA系统靶向EGFP-PEST后，基因编辑效果的验证 | 第40-44页 |
| 2.3.1 低稳定性绿色荧光蛋白EGFP-PEST的载体构建及表达验证 | 第40-43页 |
| 2.3.2 流式检测靶向EGFP-PEST后的EGFP表达率 | 第43页 |
| 2.3.3 检测突变 | 第43页 |
| 2.3.4 Real-time PCR检测EGFP的mRNA水平 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 4 结论 | 第45-46页 |
| 第三部分 NgAgo-gDNA系统对肿瘤细胞增殖的影响 | 第46-50页 |
| 1 材料与方法 | 第46-47页 |
| 1.1 材料 | 第46页 |
| 1.1.1 实验对象 | 第46页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第46页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第46页 |
| 1.1.4 主要溶液的配置 | 第46页 |
| 1.2 方法 | 第46-47页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第46页 |
| 1.2.2 细胞传代、复苏及冻存 | 第46页 |
| 1.2.3 目的质粒、gDNA以及NgAgo共转染到肿瘤细胞中 | 第46-47页 |
| 2 结果 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 综述 基于基因编辑技术的肿瘤基因疗法 | 第54-62页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 个人简历 | 第63页 |
