| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1.1 性别决定的多样性 | 第14-17页 |
| 1.1.1 XY染色体决定型 | 第14-15页 |
| 1.1.2 ZW染色体决定型 | 第15-16页 |
| 1.1.3 混合型性别决定 | 第16页 |
| 1.1.4 温度依赖型性别决定 | 第16-17页 |
| 1.2 昆虫的性别决定 | 第17-18页 |
| 1.3 果蝇的性别决定 | 第18-20页 |
| 1.3.1 果蝇性别调控级联通路 | 第18-19页 |
| 1.3.2 剂量补偿 | 第19页 |
| 1.3.3 果蝇中sxl基因的研究 | 第19-20页 |
| 1.4 家蚕的性别决定 | 第20-22页 |
| 1.4.1 性染色体的研究 | 第20-21页 |
| 1.4.2 性别调控基因的研究 | 第21-22页 |
| 1.4.3 BmSxl基因的研究 | 第22页 |
| 1.5 选择性剪接 | 第22-24页 |
| 第2章 引言 | 第24-26页 |
| 2.1 研究的背景及目的意义 | 第24页 |
| 2.2 科学问题及研究内容 | 第24-25页 |
| 2.3 技术路线 | 第25-26页 |
| 第3章 BmSxl基因的剪接调控因子 | 第26-38页 |
| 3.1 材料和方法 | 第26-28页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第26页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第26-27页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第27页 |
| 3.1.4 主要溶液的配制 | 第27-28页 |
| 3.2 实验方法与步骤 | 第28-34页 |
| 3.2.1 RNA的合成 | 第28-30页 |
| 3.2.2 生物素标记 | 第30-31页 |
| 3.2.3 抽提核蛋白 | 第31-32页 |
| 3.2.4 BCA法蛋白定量 | 第32页 |
| 3.2.5 RNA-Protein Pull Down | 第32-34页 |
| 3.2.6 质谱鉴定 | 第34页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第34-35页 |
| 3.3.1 目的RNA的合成 | 第34页 |
| 3.3.2 RNA序列的生物素标记 | 第34页 |
| 3.3.3 RNA-Protein Pull Down | 第34-35页 |
| 3.3.4 质谱分析 | 第35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-38页 |
| 第4章 蛋白的原核表达与纯化 | 第38-50页 |
| 4.1 材料与方法 | 第38-41页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第38页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第38页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第38-39页 |
| 4.1.4 主要溶剂及配制 | 第39-41页 |
| 4.2 实验方法与步骤 | 第41-46页 |
| 4.2.1 目的基因的克隆 | 第41-44页 |
| 4.2.2 原核表达 | 第44-45页 |
| 4.2.3 目的蛋白纯化 | 第45-46页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第46-48页 |
| 4.3.1 构建原核表达载体 | 第46-47页 |
| 4.3.2 原核表达条件初探 | 第47页 |
| 4.3.3 蛋白纯化 | 第47-48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第5章 Bmsxl的剪接调控位点 | 第50-60页 |
| 5.1 材料与方法 | 第50-51页 |
| 5.1.1 材料 | 第50页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第50页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第50页 |
| 5.1.4 主要试剂的配制 | 第50-51页 |
| 5.2 实验方法与步骤 | 第51-58页 |
| 5.2.1 设置突变 | 第51-52页 |
| 5.2.2 构建过表达载体 | 第52-56页 |
| 5.2.3 细胞培养及转染 | 第56页 |
| 5.2.4 RNA提取 | 第56-57页 |
| 5.2.5 反转录 | 第57页 |
| 5.2.6 RT-PCR | 第57-58页 |
| 5.2.7 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第58页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第58-59页 |
| 5.3.1 目的片段的扩增 | 第58页 |
| 5.3.2 构建过表达载体 | 第58-59页 |
| 5.3.3 RT-PCR检测 | 第59页 |
| 5.4 讨论 | 第59-60页 |
| 第6章 剪接突变位点与剪接因子的关系 | 第60-68页 |
| 6.1 材料与方法 | 第60-61页 |
| 6.1.1 材料 | 第60页 |
| 6.1.2 实验仪器 | 第60页 |
| 6.1.3 实验试剂 | 第60页 |
| 6.1.4 主要溶液的配制 | 第60-61页 |
| 6.2 实验方法与步骤 | 第61-64页 |
| 6.2.1 设计并制备探针 | 第61-62页 |
| 6.2.2 探针溶解和稀释 | 第62页 |
| 6.2.3 凝胶阻滞实验 | 第62-63页 |
| 6.2.4 冷竞争实验 | 第63-64页 |
| 6.3 实验结果与分析 | 第64-65页 |
| 6.3.1 探针筛选 | 第64-65页 |
| 6.3.2 冷竞争实验 | 第65页 |
| 6.4 讨论 | 第65-68页 |
| 第7章 BmSXL与性别调控蛋白的互作 | 第68-86页 |
| 7.1 材料与方法 | 第68-72页 |
| 7.1.1 实验材料 | 第68页 |
| 7.1.2 实验仪器 | 第68-69页 |
| 7.1.3 实验试剂 | 第69页 |
| 7.1.4 主要溶剂的配制 | 第69-72页 |
| 7.2 实验方法与步骤 | 第72-80页 |
| 7.2.1 免疫共沉淀实验 | 第72-76页 |
| 7.2.2 双分子荧光互补实验 | 第76-80页 |
| 7.3 结果与分析 | 第80-84页 |
| 7.3.1 BmSXL与BmPSI、BmIMP、BmMasc的CO-IP实验 | 第80-82页 |
| 7.3.2 BmSXL与BmPSI、BmIMP、BmMasc的BIFC实验 | 第82-84页 |
| 7.4 讨论 | 第84-86页 |
| 第8章 综合与结论 | 第86-88页 |
| 1.BmSxl 的剪接调控因子 | 第86页 |
| 2.heterogeneous nuclear ribonucleoprotein 87F-like 的原核表达纯化 | 第86页 |
| 3.BmSxl 对自身剪接起重要调控作用的位点 | 第86页 |
| 4.BmSxl 的剪接调控序列与剪接因子的结合实验 | 第86-87页 |
| 5.Bmsxl 与其他性别调控基因的互作 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-94页 |
| 在读期间发表论文及参与课题 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
