| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 研究背景 | 第12-44页 |
| 1. 细胞抗病毒天然免疫 | 第12-26页 |
| 1.1 天然免疫系统 | 第12页 |
| 1.2 天然免疫对病原的模式识别机制 | 第12-18页 |
| 1.2.1 Toll样受体 | 第13-14页 |
| 1.2.2 RIG-I样受体 | 第14-16页 |
| 1.2.3 NOD样受体 | 第16-17页 |
| 1.2.4 胞浆DNA受体 | 第17-18页 |
| 1.3 干扰素及其诱导与效应通路 | 第18-20页 |
| 1.3.1 干扰素的发现及其抗病毒抗肿瘤功能 | 第18-19页 |
| 1.3.2 干扰素家族分类 | 第19-20页 |
| 1.4 Ⅰ型干扰素基因的结构和调控 | 第20-24页 |
| 1.4.1 Ⅰ型干扰素基因启动子的结构 | 第20-21页 |
| 1.4.2 Ⅰ型干扰素基因的表达调控 | 第21-24页 |
| 1.5 IRF3在Ⅰ型干扰素诱导通路中的作用 | 第24-26页 |
| 1.5.1 IRF3的结构与功能简介 | 第24-25页 |
| 1.5.2 IRF3 C端的结构研究 | 第25页 |
| 1.5.3 IRF3活性的负调控 | 第25-26页 |
| 2. 细胞核质转运机制 | 第26-44页 |
| 2.1 细胞核转运机制 | 第26-28页 |
| 2.2 核蛋白入核通路 | 第28-30页 |
| 2.2.1 核蛋白经典入核循环通路 | 第28-30页 |
| 2.3 核定位信号 | 第30-31页 |
| 2.4 importin-α蛋白结构与家族成员 | 第31-35页 |
| 2.4.1 importin-α的蛋白结构 | 第31-33页 |
| 2.4.2 importin-α的家族成员 | 第33-35页 |
| 2.5 STAT家族成员的核转运机制 | 第35-44页 |
| 2.5.1 STAT家族成员简介 | 第35-37页 |
| 2.5.2 STAT1的入核 | 第37-39页 |
| 2.5.3 STAT2的入核 | 第39-40页 |
| 2.5.4 STAT3的入核 | 第40-42页 |
| 2.5.5 STAT5的入核 | 第42-44页 |
| 第二章 实验材料和实验方法 | 第44-62页 |
| 1. 实验材料 | 第44-49页 |
| 1.1 细胞及细胞培养 | 第44页 |
| 1.2 载体构建 | 第44页 |
| 1.3 荧光素酶报告基因实验所需材料 | 第44-45页 |
| 1.4 定点突变实验 | 第45页 |
| 1.5 亚细胞组分分离实验 | 第45页 |
| 1.6 ELISA检测试剂盒 | 第45-46页 |
| 1.7 抗体及试剂 | 第46页 |
| 1.8 病毒及细胞刺激物 | 第46页 |
| 1.9 免疫印迹以及免疫荧光实验所需材料 | 第46页 |
| 1.10 细胞亚组分分离实验所需材料 | 第46页 |
| 1.11 凝胶阻滞电泳实验 | 第46-47页 |
| 1.12 实验室基本实验试剂配置 | 第47-48页 |
| 1.13 实验仪器 | 第48-49页 |
| 2. 实验方法 | 第49-62页 |
| 2.1 质粒的构建 | 第49-53页 |
| 2.1.1 PCR扩增基因片段 | 第49-50页 |
| 2.1.2 酶切载体及扩增DNA目的片段的回收 | 第50页 |
| 2.1.3 限制性内切酶反应 | 第50-51页 |
| 2.1.4 连接反应 | 第51页 |
| 2.1.5 Inoue感受态细胞的制备 | 第51页 |
| 2.1.6 大肠杆菌转化 | 第51-52页 |
| 2.1.7 菌落PCR筛选阳性克隆 | 第52页 |
| 2.1.8 无内毒素超纯质粒小量提取 | 第52-53页 |
| 2.2 细胞培养与转染 | 第53-54页 |
| 2.3 免疫印迹实验 | 第54-55页 |
| 2.3.1 制作样品 | 第54页 |
| 2.3.2 聚丙烯凝胶电泳及免疫印迹 | 第54-55页 |
| 2.4 非变性聚丙烯凝胶电泳 | 第55-56页 |
| 2.4.1 实验前样品及试剂准备 | 第55页 |
| 2.4.2 实验步骤 | 第55-56页 |
| 2.5 ELISA实验 | 第56-57页 |
| 2.5.1 实验原理 | 第56页 |
| 2.5.2 样品准备 | 第56-57页 |
| 2.5.3 ELISA实验步骤 | 第57页 |
| 2.6 荧光素酶报告基因实验 | 第57-58页 |
| 2.6.1 实验原理 | 第57-58页 |
| 2.6.2 实验前样品及试剂准备 | 第58页 |
| 2.6.3 实验步骤 | 第58页 |
| 2.7 激光共聚焦显微镜观察实验 | 第58-59页 |
| 2.7.1 样品准备 | 第58页 |
| 2.7.2 实验步骤 | 第58-59页 |
| 2.8 亚细胞组分分离实验 | 第59页 |
| 2.9 重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第59-60页 |
| 2.9.1 实验材料及试剂的准备 | 第59-60页 |
| 2.9.2 重组蛋白诱导表达及纯化 | 第60页 |
| 2.10 凝胶阻滞电泳 | 第60-61页 |
| 2.10.1 样品的制备 | 第60-61页 |
| 2.10.2 凝胶阻滞电泳 | 第61页 |
| 2.11 VSV空斑实验 | 第61-62页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第62-85页 |
| 1. 研究背景与立项依据 | 第62-64页 |
| 2. 实验结果 | 第64-79页 |
| 2.1 内源IRF3在病毒刺激前后的核质定位 | 第64页 |
| 2.2 IRF3的核定位信号位于氨基酸65-131位之间 | 第64-66页 |
| 2.3 IRF3入核信号区关键碱性氨基酸的确定 | 第66-68页 |
| 2.4 不同IRF3失活点突变的二聚化、入核情况分析 | 第68-70页 |
| 2.5 IRF3不同点突变在失活NES后的入核能力分析 | 第70-73页 |
| 2.6 免疫荧光分析IRF3不同点突变的入核情况 | 第73-75页 |
| 2.7 IRF3不同点突变的DNA启动子结合能力分析 | 第75-77页 |
| 2.8 IRF3 NLS关键碱性氨基酸的抗病毒作用 | 第77-79页 |
| 3. 小结与讨论 | 第79-85页 |
| 参考文献 | 第85-93页 |
| 作者简历 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
