| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 研究背景 | 第9-14页 |
| 1.1.1 乳腺癌耐药现状的概述 | 第9页 |
| 1.1.2 乳腺癌耐药诊断技术现状的概述 | 第9-10页 |
| 1.1.3 细胞膜微泡来源的TRPC5与耐药的概述 | 第10-12页 |
| 1.1.4 MUC1的概述 | 第12-13页 |
| 1.1.5 免疫磁珠的概述 | 第13页 |
| 1.1.6 时间分辨荧光免疫分析法的概述 | 第13-14页 |
| 1.2 研究意义 | 第14-15页 |
| 1.3 研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第16-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 细胞、抗体及磁珠、临床样本 | 第16页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.3 主要仪器与耗材 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-25页 |
| 2.2.1 试剂的配制 | 第18页 |
| 2.2.2 细胞的复苏、培养、传代及冻存 | 第18-19页 |
| 2.2.3 细胞免疫荧光染色 | 第19-20页 |
| 2.2.4 细胞分泌微泡收集及染色 | 第20页 |
| 2.2.5 抗体包被磁珠富集微泡 | 第20页 |
| 2.2.6 激光共聚焦显微镜观察 | 第20-21页 |
| 2.2.7 免疫原与包被原制备 | 第21页 |
| 2.2.8 多克隆抗体制备 | 第21页 |
| 2.2.9 抗体包被磁珠 | 第21页 |
| 2.2.10 Eu~(3+)-羊抗兔抗体制备 | 第21页 |
| 2.2.11 包被板固相抗原制备 | 第21-22页 |
| 2.2.12 样品预处理方法 | 第22页 |
| 2.2.13 间接竞争TRPC5（EVs）-TRFIA步骤 | 第22页 |
| 2.2.14 TRPC5（EVs）-TRFIA方法最适工作浓度的选择 | 第22-23页 |
| 2.2.15 反应时间的确定 | 第23页 |
| 2.2.16 磁珠富集条件的确定 | 第23页 |
| 2.2.17 标准曲线的绘制 | 第23页 |
| 2.2.18 加样回收率 | 第23-24页 |
| 2.2.19 稳定性 | 第24页 |
| 2.2.20 分析灵敏度 | 第24页 |
| 2.2.21 统计方法 | 第24-25页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第25-36页 |
| 3.1 耐药乳腺癌细胞来源细胞膜微泡富集方法的建立 | 第25-26页 |
| 3.1.1 免疫磁珠的选择 | 第25页 |
| 3.1.2 磁珠富集条件的选择 | 第25-26页 |
| 3.1.3 讨论 | 第26页 |
| 3.2 微泡表面耐药标志物TRPC5检测方法的构建 | 第26-32页 |
| 3.2.1 TRPC5胞外段抗体的选择 | 第26-27页 |
| 3.2.2 TRFIA反应模式的选择 | 第27-28页 |
| 3.2.3 96 孔微孔板的选择 | 第28页 |
| 3.2.4 抗TRPC5抗体稀释比的选择 | 第28页 |
| 3.2.5 Eu~(3+)-羊抗兔IgG稀释度的选择 | 第28-29页 |
| 3.2.6 TRPC5多肽固相抗原包被量的选择 | 第29页 |
| 3.2.7 Eu~(3+)-羊抗兔IgG示踪时间的选择 | 第29-30页 |
| 3.2.8 最适竞争结合时间的确定 | 第30页 |
| 3.2.9 TRPC5（EVs）-TRFIA标准曲线的绘制 | 第30-31页 |
| 3.2.10 讨论 | 第31-32页 |
| 3.3 TRPC5（EVs）时间分辨荧光免疫分析方法的考核 | 第32-33页 |
| 3.3.1 TRPC5（EVs）-TRFIA方法的分析灵敏度 | 第32页 |
| 3.3.2 TRPC5（EVs）-TRFIA方法稳定性和精确度 | 第32页 |
| 3.3.3 TRPC5（EVs）-TRFIA方法回收率 | 第32-33页 |
| 3.3.4 讨论 | 第33页 |
| 3.4 TRPC5（EVs）-TRFIA用于临床样本的检测 | 第33-36页 |
| 3.4.1 间接TRPC5（EVs）-TRFIA方法临床应用 | 第33-34页 |
| 3.4.2 MUC1磁珠富集EVs与离心分离EVs效果比较 | 第34页 |
| 3.4.3 讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 总结与展望 | 第36-38页 |
| 4.1 主要结论 | 第36页 |
| 4.2 问题与展望 | 第36-38页 |
| 致谢 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 附录A 论文所搜集临床患者样本的肿瘤病理学特征 | 第44-46页 |
| 附录B 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第46页 |
