| 摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第1章 前言 | 第12-17页 |
| 1.1 炭疽芽胞杆菌的生物学特性 | 第12页 |
| 1.2 炭疽芽胞杆菌的致病机理 | 第12-15页 |
| 1.2.1 炭疽毒素 | 第13-14页 |
| 1.2.2 荚膜 | 第14页 |
| 1.2.3 炭疽杆菌其他毒力因子 | 第14-15页 |
| 1.3 炭疽芽胞杆菌疫苗研究现状 | 第15-16页 |
| 1.3.1 国内研究现状 | 第15-16页 |
| 1.3.2 国外研究现状 | 第16页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第16-17页 |
| 第2章 炭疽杆菌A16D2△BA2380::spc的构建 | 第17-32页 |
| 2.1 材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第17-18页 |
| 2.1.2 仪器与试剂 | 第18-19页 |
| 2.2 方法 | 第19-24页 |
| 2.2.2 主要试剂的配制 | 第19-20页 |
| 2.2.3 引物设计 | 第20-21页 |
| 2.2.4 重组质粒pk2380usd的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.4.1 供体质粒的构建 | 第21页 |
| 2.2.4.2 受体质粒的构建 | 第21页 |
| 2.2.4.3 “Golden Gate”克隆体系构建重组打靶质粒 p K2380usd | 第21-22页 |
| 2.2.5 重组质粒 pk2380usd 电转化大肠杆菌 JM110 | 第22页 |
| 2.2.6 重组质粒pk2380usd电转化炭疽杆菌A16D2 | 第22-23页 |
| 2.2.7 突变株A16D2△BA2380::spc的筛选 | 第23页 |
| 2.2.8 上清液分泌蛋白组检测△BA2380的表达 | 第23-24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-30页 |
| 2.3.1 重组质粒的构建 | 第24-27页 |
| 2.3.1.1 供体质粒的构建 | 第24页 |
| 2.3.1.2 受体质粒pKMBK的构建 | 第24-25页 |
| 2.3.1.3 重组打靶质粒pK2380usd的构建 | 第25-27页 |
| 2.3.2 质粒pk2380usd电转炭疽杆菌A16D2及重组菌验证 | 第27页 |
| 2.3.3 突变株A16D2△BA2380::spc的筛选和验证 | 第27-28页 |
| 2.3.4 出发菌株和突变株上清液BA2380蛋白分析 | 第28-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第3章 回复互补株pBE2A-BA2380/A16D2的构建 | 第32-40页 |
| 3.1 材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 质粒与菌株 | 第32页 |
| 3.1.2 仪器与试剂 | 第32-33页 |
| 3.2 方法 | 第33-36页 |
| 3.2.1 培养基的配制 | 第33页 |
| 3.2.2 主要试剂配制 | 第33-34页 |
| 3.2.3 回复突变质粒pBE2A-BA2380的构建 | 第34-35页 |
| 3.2.3.1 引物设计 | 第34页 |
| 3.2.3.2 BA2830基因片段的PCR扩增 | 第34页 |
| 3.2.3.3 目的片段与质粒载体的酶切连接 | 第34-35页 |
| 3.2.4 pBE2A-BA2380电转DH5α 感受态 | 第35页 |
| 3.2.5 pBE2A-BA2380电转JM110感受态 | 第35页 |
| 3.2.6 回复互补突变株pBE2A-BA2380/A16D2的构建 | 第35-36页 |
| 3.2.6.1 炭疽杆菌A16D2△BA2380::spc感受态的制备 | 第35-36页 |
| 3.2.6.2 电转A16D2△BA2380::spc感受态及阳性克隆子的筛选 | 第36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-38页 |
| 3.3.1 炭疽杆菌BA2380基因的PCR扩增与测序 | 第36页 |
| 3.3.2 回复突变质粒pBE2A-BA2380的构建 | 第36-37页 |
| 3.3.3 回复互补株pBE2A-BA2380/A16D2的筛选 | 第37-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第4章 BA2380基因缺失突变株与回复互补株生理特性 | 第40-46页 |
| 4.1 材料 | 第40-41页 |
| 4.1.1 菌株 | 第40页 |
| 4.1.2 仪器与试剂 | 第40-41页 |
| 4.2 方法 | 第41-43页 |
| 4.2.1 培养基的配制 | 第41页 |
| 4.2.2 主要试剂配制 | 第41-42页 |
| 4.2.3 生长曲线的测定 | 第42页 |
| 4.2.4 芽胞收集和染色 | 第42页 |
| 4.2.5 Western blot分析确认BA2380在炭疽芽胞杆菌中表达 | 第42-43页 |
| 4.3 结果与分析 | 第43-45页 |
| 4.3.1 生长曲线的测定 | 第43-44页 |
| 4.3.2 芽胞收集与染色 | 第44页 |
| 4.3.3 Western blot分析确认BA2380在炭疽芽胞杆菌中表达 | 第44-45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-46页 |
| 第5章 结论与展望 | 第46-47页 |
| 5.1 结论 | 第46页 |
| 5.2 展望 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 作者在学期间取得的学术成果 | 第52-53页 |
| 附录1 试剂盒的使用步骤 | 第53-54页 |
