| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 文献综述 | 第8-16页 |
| 1.1 小麦赤霉病的发生与危害 | 第8-11页 |
| 1.1.1 小麦赤霉病的发生流行 | 第8-9页 |
| 1.1.1.1 小麦赤霉病的主要病原菌 | 第8页 |
| 1.1.1.2 发生流行规律 | 第8-9页 |
| 1.1.2 小麦赤霉病菌主要毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON毒素) | 第9-11页 |
| 1.1.2.1 DON毒素的毒理 | 第9页 |
| 1.1.2.2 小麦食品中DON毒素含量 | 第9-11页 |
| 1.2 表达载体构建方法 | 第11-14页 |
| 1.2.1 传统的载体构建方法 | 第11页 |
| 1.2.2 一步克隆法 | 第11-12页 |
| 1.2.3 重组融合PCR法 | 第12-13页 |
| 1.2.4 In-Fusion试剂盒法 | 第13-14页 |
| 1.3 PEG介导的原生质体转化 | 第14-16页 |
| 2 引言 | 第16-17页 |
| 2.1 研究目的及意义 | 第16页 |
| 2.2 研究内容 | 第16-17页 |
| 3 材料与方法 | 第17-25页 |
| 3.1 禾谷镰刀菌三个同源CYP51基因的GFP和RFP蛋白融合表达载体构建 | 第17-21页 |
| 3.1.1 供试菌株和质粒 | 第17页 |
| 3.1.2 供试培养基 | 第17页 |
| 3.1.3 供试引物 | 第17页 |
| 3.1.4 RFP骨架载体质粒构建 | 第17-18页 |
| 3.1.5 镰刀菌基因组DNA小量提取 | 第18页 |
| 3.1.6 CYP51基因高保真酶扩增 | 第18-19页 |
| 3.1.7 GFP/RFP融合表达载体连接与转化 | 第19-21页 |
| 3.2 CYP51C过量表达载体与互补表达载体构建 | 第21-23页 |
| 3.2.1 供试菌株和质粒 | 第21页 |
| 3.2.2 供试培养基 | 第21-22页 |
| 3.2.3 供试引物 | 第22页 |
| 3.2.4 DNA提取 | 第22页 |
| 3.2.5 CYP51C过量、互补表达载体目的基因片段扩增 | 第22页 |
| 3.2.6 CYP51C-O、CYP51C-C表达载体构建连接与转化 | 第22-23页 |
| 3.3 质粒载体的遗传转化 | 第23-25页 |
| 3.3.1 镰刀菌分生孢子的准备 | 第23页 |
| 3.3.2 原生质体制备 | 第23-24页 |
| 3.3.3 PEG介导的原生质体转化 | 第24页 |
| 3.3.4 转化子筛选 | 第24-25页 |
| 4 结果与分析 | 第25-31页 |
| 4.1 CYP51基因GFP和RFP蛋白融合表达载体构建 | 第25-28页 |
| 4.1.1 GFP/RFP载体骨架改造 | 第25页 |
| 4.1.2 GFP、RFP表达载体与CYP51基因双酶切 | 第25-26页 |
| 4.1.3 GFP/RFP融合表达载体构建连接与转化结果 | 第26-28页 |
| 4.2 CYP51C过量、互补表达载体构建 | 第28-30页 |
| 4.2.1 CYP51C-O CYP51C-C与质粒双酶切 | 第28页 |
| 4.2.2 CYP51C过量、互补表达载体构建连接与转化结果 | 第28-30页 |
| 4.3 原生质体转化 | 第30-31页 |
| 5 讨论 | 第31-32页 |
| 6 结论 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-38页 |
| 附录 | 第38-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
