| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1.1 FAK和mTOR | 第13-15页 |
| 1.1.1 FAK及其信号通路 | 第13-14页 |
| 1.1.2 mTOR及其信号通路 | 第14-15页 |
| 1.2 FAK/mTOR信号通路 | 第15-16页 |
| 1.2.1 FAK/PI3K/Akt/mTOR信号通路 | 第15-16页 |
| 1.2.2 FAK/MAPK/mTOR信号通路 | 第16页 |
| 1.2.3 FAK/TSC2/mTOR信号通路 | 第16页 |
| 1.3 TSC2及其信号通路 | 第16-21页 |
| 1.3.1 TCS2的结构与功能 | 第17页 |
| 1.3.2 TSC2在mTOR信号通路中的作用 | 第17-18页 |
| 1.3.3 TSC1/2信号通路 | 第18-21页 |
| 第二章 酵母双杂交鉴定FAK与TSC2的相互作用功能域 | 第21-40页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 人293T细胞总RNA的提取与cDNA第一链合成 | 第22页 |
| 2.2.2 FAK、TSC2引物设计与基因克隆 | 第22-25页 |
| 2.2.3 中间载体的构建 | 第25页 |
| 2.2.4 诱饵载体、靶载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.5 感受态酵母的转化 | 第26页 |
| 2.2.6 酵母菌株阳性菌的PCR鉴定 | 第26页 |
| 2.2.7 重组诱饵表达质粒的毒性检测及自激活鉴定 | 第26页 |
| 2.2.8 酵母交配及筛选 | 第26-27页 |
| 2.3 结果 | 第27-38页 |
| 2.3.1 人FAK和TSC2基因克隆 | 第27-28页 |
| 2.3.2 中间载体的构建 | 第28-31页 |
| 2.3.3 酵母双杂交诱饵载体和靶载体构建 | 第31-33页 |
| 2.3.4 酵母菌株阳性菌的PCR鉴定 | 第33页 |
| 2.3.5 重组诱饵表达质粒的毒性检测及自激活鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.6 酵母双杂交两种阳性菌株交配结果 | 第34-36页 |
| 2.3.7 酵母双杂交筛选及相互作用片段的确定 | 第36-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 人293T细胞中FAK基因过表达、转录后沉默对mTOR信号通路活性的影响 | 第40-47页 |
| 3.1 材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 细胞系 | 第40页 |
| 3.1.2 菌株和质粒 | 第40页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第40-41页 |
| 3.2 方法 | 第41-43页 |
| 3.2.1 人FAK基因过表达载体的构建与质粒提取 | 第41页 |
| 3.2.2 表达靶向FAK基因的shRNA质粒的提取 | 第41页 |
| 3.2.3 人293T细胞的培养与质粒的转染 | 第41-42页 |
| 3.2.4 蛋白提取 | 第42页 |
| 3.2.5 Western blot分析检测 | 第42-43页 |
| 3.3 结果 | 第43-46页 |
| 3.3.1 人FAK基因过表达载体的构建 | 第43页 |
| 3.3.2 人293T细胞的培养与质粒的转染 | 第43-44页 |
| 3.3.3 FAK过表达和FAK转录后沉默对mTOR信号通路活性的影响 | 第44-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 FAK和TSC2基因共转酵母表达及TSC2蛋白特异磷酸化位点的鉴定 | 第47-56页 |
| 4.1 材料 | 第47页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第47页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 4.2 方法 | 第47-50页 |
| 4.2.1 pGADT7-FAK、pGBKT7-TSC2质粒电转化酵母菌 | 第47-48页 |
| 4.2.2 酵母总蛋白的提取 | 第48页 |
| 4.2.3 免疫共沉淀 | 第48页 |
| 4.2.4 WB分析 | 第48-49页 |
| 4.2.5 TSC2蛋白在酵母菌中的诱导表达 | 第49页 |
| 4.2.6 磷酸化组鉴定FAK、TSC2相互作用的磷酸化位点 | 第49-50页 |
| 4.3 结果 | 第50-55页 |
| 4.3.1 pGADT7-FAK和pGBKT7-TSC2共转酵母菌的PCR鉴定 | 第50页 |
| 4.3.2 免疫共沉淀鉴定酵母中FAK、TSC2相互作用 | 第50-51页 |
| 4.3.3 TSC2蛋白在酵母菌中的诱导表达 | 第51-52页 |
| 4.3.4 磷酸化组鉴定FAK作用于TSC2的特异磷酸化位点 | 第52-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
