| 中文摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-14页 |
| 2 材料和方法 | 第14-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-16页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第14页 |
| 2.1.2 细胞株和质粒 | 第14-15页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第15-16页 |
| 2.2 细胞培养,MRNA水平和蛋白水平定量分析 | 第16-25页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第16-18页 |
| 2.2.2 实时荧光定量PCR | 第18-21页 |
| 2.2.3 免疫印迹(western blot)实验 | 第21-25页 |
| 2.3 细胞转染 | 第25-27页 |
| 2.3.1 慢病毒介导的细胞转染 | 第25-26页 |
| 2.3.2 脂质体介导的siRNA转染 | 第26-27页 |
| 2.4 蛋白组学分析 | 第27-31页 |
| 2.4.1 双向电泳实验 | 第27-30页 |
| 2.4.2 质谱鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4.3 生物信息学分析 | 第31页 |
| 2.5 细胞行为学分析 | 第31-34页 |
| 2.5.1 EdU检测细胞增殖能力 | 第31-32页 |
| 2.5.2 体外克隆形成实验 | 第32-33页 |
| 2.5.3 划痕实验(Wound-healing) | 第33页 |
| 2.5.4 Transwell小室迁移实验 | 第33-34页 |
| 2.6 动物实验 | 第34-35页 |
| 2.6.1 裸鼠皮下瘤模型 | 第34-35页 |
| 2.6.2 免疫组织化学 | 第35页 |
| 2.7 统计学分析 | 第35-37页 |
| 3 结果 | 第37-56页 |
| 3.1 DICER低表达对卵巢癌细胞增殖和迁移能力的影响 | 第37-40页 |
| 3.1.1 成功构建稳定下调Dicer的卵巢癌细胞株A2780-shDicer,CAOV3-shDicer和SKOV3-shDicer | 第37-38页 |
| 3.1.2 稳定低表达Dicer的卵巢癌细胞增殖和迁移能力增强 | 第38-40页 |
| 3.2 双向电泳鉴定低表达DICER后卵巢癌细胞蛋白组学改变 | 第40-41页 |
| 3.3 生物信息学分析筛选下游靶蛋白及DICER对其下游靶蛋白的调控机制 | 第41-49页 |
| 3.3.1 蛋白质谱和生物信息学分析所得蛋白并且验证下游靶蛋白的表达改变 | 第41-47页 |
| 3.3.2 Dicer与其下游靶蛋白间的相互作用分析 | 第47-48页 |
| 3.3.3 Dicer调控PDIA3蛋白上游microRNAs | 第48-49页 |
| 3.4 sIPDIA3敲除效率及抑制PDIA3逆转卵巢癌细胞中DICER低表达引起的恶性生物学行为 | 第49-53页 |
| 3.4.1 低表达Dicer卵巢癌细胞中转染siPDIA3抑制PDIA3的表达 | 第49-50页 |
| 3.4.2 抑制PIDA3表达可逆转Dicer沉默诱导增强的细胞增殖能力 | 第50页 |
| 3.4.3 抑制PIDA3表达可逆转Dicer沉默诱导增强的细胞迁移能力 | 第50-53页 |
| 3.5 DICER调控PDIA3影响卵巢癌移植瘤生长 | 第53-56页 |
| 3.5.1 裸鼠皮下瘤模型验证Dicer和PDIA3对卵巢癌恶性生物学行为的影响 | 第53-54页 |
| 3.5.2 Dicer调控PDIA3影响卵巢癌细胞恶性生物学行为的分子机制 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 综述 | 第63-75页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录一 | 第75-77页 |
| 附录二 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-81页 |
