摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
符号说明 | 第11-13页 |
第一章 综述无脊椎动物的先天免疫与清道夫受体 | 第13-24页 |
一、无脊椎动物先天免疫概述 | 第13-16页 |
1. 物理防御 | 第13页 |
2. 细胞免疫 | 第13-14页 |
3. 体液免疫 | 第14-16页 |
二、模式识别受体在先天免疫中的功能 | 第16-18页 |
1. Toll样受体 | 第16页 |
2. 半乳糖苷结合凝集素 | 第16-17页 |
3. 含硫酯蛋白 | 第17页 |
4. 丝氨酸蛋白酶同系物 | 第17-18页 |
5. 清道夫受体 | 第18页 |
三、清道夫受体的结构与功能 | 第18-22页 |
1. 清道夫受体的结构 | 第18-20页 |
2. 清道夫受体在先天免疫中的作用 | 第20-22页 |
四、本研究的科学问题与意义 | 第22-24页 |
第二章 C型清道夫受体促进血细胞对WSSV的吞噬作用 | 第24-69页 |
一、前言 | 第24-25页 |
二、材料与方法 | 第25-34页 |
1. 试剂,仪器,菌株和载体 | 第25-26页 |
2. 实验动物 | 第26页 |
3. WSSV接种液的制备和对虾的免疫刺激 | 第26页 |
4. 完整WSSV的制备 | 第26-27页 |
5. WSSV绝对拷贝数的测定 | 第27-28页 |
6. MjSRC的cDNA克隆和序列分析 | 第28-29页 |
7. MjSRC的体外重组表达、纯化和抗血清的制备 | 第29页 |
8. MjSRC的组织分布和表达模式 | 第29-30页 |
9. RNA干扰和过表达实验 | 第30-31页 |
10. WSSV的荧光标记以及吞噬率和吞噬指数的检测 | 第31页 |
11. 免疫细胞化学实验 | 第31-32页 |
12. Pull-down实验和co-IP实验 | 第32页 |
13. rMjSRC-EX的胶体金标记和免疫电镜实验 | 第32-33页 |
14. 交联实验 | 第33页 |
15. 网格蛋白抑制剂实验 | 第33-34页 |
16. 溶酶体染色和溶酶体抑制剂 | 第34页 |
17. 对虾存活率的统计 | 第34页 |
三、结果 | 第34-64页 |
1. MjSRC全长cDNA的克隆、序列比对和进化树的构建 | 第34-39页 |
2. 对虾体内的MjSRC在受到WSSV刺激后呈上调表达 | 第39-42页 |
3. MjSRC限制对虾体内WSSV的复制 | 第42-45页 |
4. MjSRC促进日本囊对虾对WSSV的吞噬作用 | 第45-48页 |
5. MjSRC可以识别WSSV的囊膜蛋白 | 第48-51页 |
6. 在受到WSSV刺激后,MjSRC发生三聚化并从细胞膜内化到细胞质 | 第51-54页 |
7. Mjβ-arrestin2与MjSRC相互作用并介导MjSRC的内化 | 第54-57页 |
8. MjSRC-arrestin2介导的血细胞对WSSV的吞噬是网格蛋白依赖的 | 第57-62页 |
9. 血细胞中的溶酶体参与WSSV的清除 | 第62-64页 |
四、讨论 | 第64-69页 |
第三章 MjSRC加强血细胞的对细菌的吞噬作用和调控抗菌肽的表达 | 第69-84页 |
一、前言 | 第69-70页 |
二、材料与方法 | 第70-74页 |
1. 实验动物准备和RNA提取 | 第70-71页 |
2. 蛋白的重组表达和纯化 | 第71-72页 |
3. 荧光定量PCR | 第72页 |
4. 蛋白免疫印迹技术 | 第72页 |
5. RNA干扰和过表达技术 | 第72页 |
6. 荧光标记细菌和血细胞吞噬率的计算 | 第72-73页 |
7. 细菌结合实验 | 第73页 |
8. 多糖结合实验 | 第73-74页 |
9. 细菌清除实验 | 第74页 |
10. 液体抑菌实验 | 第74页 |
三、结果 | 第74-81页 |
1. 对虾血细胞中的MjSRC在受到细菌刺激后上调表达 | 第74-75页 |
2. MjSRC结合不同的细菌和多糖 | 第75-77页 |
3. MjSRC在对虾体内具有清除细菌的功能 | 第77-78页 |
4. MjSRC促进血细胞对细菌的吞噬功能 | 第78-79页 |
5. MjSRC调控抗菌肽的表达但不调控吞噬相关基因的表达 | 第79-80页 |
6. MjSRC的体外抑菌活性 | 第80-81页 |
四、讨论 | 第81-84页 |
创新点总结 | 第84-85页 |
1. MjSRC具有促进血细胞吞噬WSSV的功能 | 第84页 |
2. MjSRC可以加强血细胞对细菌的吞噬能力以及调节抗菌肽基因的表达 | 第84-85页 |
参考文献 | 第85-95页 |
致谢 | 第95-97页 |
在读期间发表的论文 | 第97-99页 |
学位论文评阅及答辩情况表 | 第99页 |