| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的概述 | 第12-17页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的作用机理 | 第12-13页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的结构 | 第13-15页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的性质 | 第15页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的应用 | 第15-17页 |
| ·外源基因高效表达的影响因子 | 第17-18页 |
| ·宿主菌对表达的影响 | 第17页 |
| ·载体对表达的影响 | 第17页 |
| ·外源基因密码子偏性对表达的影响 | 第17-18页 |
| ·外源mRNA稳定性对表达的影响 | 第18页 |
| ·外源基因A+T组成对表达的影响 | 第18页 |
| ·mRNA的 5’-UTR和 3’-UTR对表达的影响 | 第18页 |
| ·其他因素的影响 | 第18页 |
| ·蛋白 3D建模的方法 | 第18-20页 |
| ·同源模建法 | 第19页 |
| ·折叠识别法 | 第19-20页 |
| ·从头预测法 | 第20页 |
| ·课题研究的主要内容 | 第20-22页 |
| 第二章 谷氨酰胺转胺酶基因生物学分析 | 第22-35页 |
| 引言 | 第22页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·实验菌株 | 第22-23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·主要培养基及溶液 | 第23-24页 |
| ·引物 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-28页 |
| ·H197菌株的活化及基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·MTG基因扩增及克隆 | 第25-27页 |
| ·蓝白斑筛选及菌落PCR检测 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-34页 |
| ·H197菌株形态及总DNA提取的检测 | 第28页 |
| ·MTG基因扩增及克隆的检测 | 第28-29页 |
| ·蓝白斑筛选及菌落PCR检测结果 | 第29-30页 |
| ·H197菌株的MTG基因全序列及理化性质分析 | 第30-32页 |
| ·MTG蛋白三级结构预测 | 第32-33页 |
| ·突变位点的设计及突变引物设计 | 第33-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 MTG定点突变基因的构建及表达 | 第35-51页 |
| 引言 | 第35页 |
| ·材料与试剂 | 第35-37页 |
| ·菌株与质粒 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·引物 | 第36页 |
| ·主要培养基及溶液 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-43页 |
| ·位点的突变 | 第37-39页 |
| ·重组菌pET-22b-MTG-M-E.coli BL21(DE3)（p-B-M-M）的构建 | 第39页 |
| ·突变型重组质粒酶切验证及PCR验证 | 第39-40页 |
| ·重组菌p-B-M和p-B-M-M的小量表达 | 第40-41页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第41-42页 |
| ·蛋白浓度测定及酶活测定 | 第42-43页 |
| ·蛋白表达的优化 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-49页 |
| ·重叠延伸PCR检测结果 | 第43-44页 |
| ·突变型重组质粒的检测 | 第44-45页 |
| ·蛋白质在细胞内位置的确定 | 第45-46页 |
| ·蛋白浓度及酶活测定结果 | 第46-47页 |
| ·不同因素对蛋白表达的影响 | 第47-49页 |
| ·本章小结 | 第49-51页 |
| 第四章 MTG的纯化及酶学性质的研究 | 第51-56页 |
| 引言 | 第51页 |
| ·实验材料 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51页 |
| ·主要溶液 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-52页 |
| ·MTG蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| ·pH对MTG酶稳定性影响的研究 | 第52页 |
| ·MTG酶热稳定性的研究 | 第52页 |
| ·金属离子对MTG酶稳定性影响的研究 | 第52页 |
| ·实验结果 | 第52-55页 |
| ·MTG蛋白纯化效果的检测 | 第52-53页 |
| ·pH对MTG酶稳定性影响的检测结果 | 第53-54页 |
| ·MTG酶的热稳定性检测结果 | 第54页 |
| ·金属离子对MTG酶活力影响的检测结果 | 第54-55页 |
| ·本章小结 | 第55-56页 |
| 研究总结与展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录A 攻读硕士学位期间发表的文章 | 第64-65页 |
| 附录B 基本培养基及常用溶液的配制 | 第65-67页 |