| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| ·表观遗传修饰 | 第13-14页 |
| ·表观遗传修饰概述 | 第13页 |
| ·DNA甲基化 | 第13-14页 |
| ·5-hmC与TET家族蛋白 | 第14页 |
| ·TET蛋白家族 | 第14-18页 |
| ·TET蛋白家族成员简介 | 第14-15页 |
| ·TET介导的DNA去甲基化 | 第15-16页 |
| ·TET蛋白和 5mC的基因组定位 | 第16页 |
| ·TET蛋白调控基因表达 | 第16-17页 |
| ·TET蛋白的辅助因子 | 第17页 |
| ·TET蛋白的生物学功能 | 第17-18页 |
| ·TET1蛋白研究进展 | 第18-21页 |
| ·Tet1基因简介 | 第18-19页 |
| ·TET1的基因组定位及其在转录调控中的作用 | 第19-20页 |
| ·TET1的生物学功能 | 第20-21页 |
| ·NLS研究进展 | 第21-23页 |
| ·核定位信号简介 | 第21页 |
| ·NLS的一般研究策略 | 第21-22页 |
| ·TET家族蛋白的NLS研究进展 | 第22-23页 |
| 第二章 小鼠TET1的真核表达载体构建及功能验证 | 第23-34页 |
| ·材料和试剂 | 第23-24页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-30页 |
| ·小鼠TET1真核表达载体构建 | 第24-28页 |
| ·NIH3T3细胞培养、传代及冻存 | 第28页 |
| ·TET1真核表达载体转染NIH3T3细胞 | 第28-29页 |
| ·细胞免疫荧光染色（Immunofluorescence, IF） | 第29页 |
| ·蛋白质免疫印迹（Western blot, WB） | 第29-30页 |
| ·实验结果 | 第30-32页 |
| ·J1 mESCs的RNA提取结果 | 第30-31页 |
| ·TET1片段扩增结果 | 第31页 |
| ·TET1真核表达载体鉴定结果 | 第31-32页 |
| ·TET1真核表达载体的功能验证 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第三章 定位TET1蛋白的功能性NLS | 第34-43页 |
| ·材料和试剂 | 第34-35页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-38页 |
| ·PSORT II预测TET1蛋白的cNLSs | 第35页 |
| ·构建截短突变体 | 第35-37页 |
| ·免疫荧光染色（IF） | 第37页 |
| ·EGFP-mTET1融合蛋白的亚细胞定位 | 第37-38页 |
| ·实验结果 | 第38-41页 |
| ·PSORT II预测结果 | 第38页 |
| ·EGFP-mTET1重组质粒的双酶切鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·IF鉴定EGFP-mTET1的亚细胞定位 | 第39-40页 |
| ·EGFP-mTET1融合蛋白的亚细胞定位 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 第四章 鉴定小鼠TET1蛋白的功能性NLS | 第43-60页 |
| ·材料和试剂 | 第43-44页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-50页 |
| ·构建缺失突变载体和定点突变载体 | 第44-47页 |
| ·构建真核表达载体pEGFP-C1-GST/GST-KKRK/GST- RKRR | 第47-49页 |
| ·构建重组质粒pEGFP-C1-GST-TET1597862/1463-1885 | 第49页 |
| ·免疫荧光染色（IF） | 第49页 |
| ·分离细胞核蛋白与细胞浆蛋白 | 第49-50页 |
| ·Western blot研究 EGFP 融合蛋白的亚细胞定位 | 第50页 |
| ·核定位信号序列的同源性分析 | 第50页 |
| ·实验结果 | 第50-58页 |
| ·重组质粒单酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·鉴定片段TET1275862中的功能性NLS | 第51-53页 |
| ·鉴定片段TET114631885中的功能性NLS | 第53-55页 |
| ·KKRK和RKRR可以介导胞质蛋白GST入核 | 第55-56页 |
| ·核定位信号KKRK和RKRR的保守性分析 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 全文结论 | 第60-61页 |
| 进一步研究课题 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
| 缩略词 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
