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王鸽α-Syn基因克隆及AVM急性中毒对其在脑组织中表达的影响

中文摘要第1-11页
英文摘要第11-13页
1 引言第13-20页
   ·α-Syn 的结构和功能第13-14页
   ·α-Syn 与神经退行性疾病第14页
   ·环境毒物对α-Syn 的影响第14-15页
     ·农药对α-Syn 的影响第14-15页
     ·金属离子对α-Syn 的影响第15页
   ·α-Syn 的检测方法第15-16页
   ·AVM 毒理学研究进展第16-18页
   ·鸽子作为实验动物的意义第18页
   ·本试验目的与意义第18-20页
2 材料与方法第20-30页
   ·主要试剂第20页
     ·主要的菌株与载体第20页
     ·主要试剂第20页
   ·主要仪器第20-21页
   ·实验动物及分组第21页
     ·实验动物饲养与处理第21页
     ·实验材料采集第21页
   ·引物设计与合成第21-22页
   ·王鸽α-Syn 基因序列的克隆第22-24页
     ·脑组织中总RNA 的抽提第22页
     ·总RNA 含量与纯度检测第22页
     ·反转录反应第22-23页
     ·王鸽α-Syn 基因PCR 扩增及鉴定第23页
     ·王鸽α-Syn 基因PCR 产物的胶回收第23页
     ·王鸽α-Syn 基因的克隆、鉴定及序列测定与分析第23-24页
     ·王鸽α-Syn 基因 3′-UTR 克隆第24页
   ·王鸽α-Syn 基因重组表达载体的构建与鉴定第24-26页
     ·王鸽α-Syn 基因的克隆、鉴定及序列测定与分析第24-25页
     ·王鸽α-Syn 原核表达载体的构建第25页
     ·王鸽α-Syn 重组表达菌的诱导表达第25页
     ·重组融合蛋白王鸽α-Syn 的SDS-PAGE 鉴定第25页
     ·重组融合王鸽α-Syn 蛋白的纯化第25-26页
   ·抗王鸽α-Syn 多克隆抗体的制备和鉴定第26-27页
     ·抗原乳化第26页
     ·动物接种第26页
     ·抗血清的收集第26页
     ·王鸽α-Syn 多克隆抗体效价测定第26-27页
     ·王鸽α-Syn 多克隆抗体特异性的鉴定第27页
   ·王鸽脑组织中α-Syn 含量的免疫组化检测第27-29页
     ·载(盖)玻片的处理第27-28页
     ·石蜡切片的制作第28页
     ·PV 免疫组化二步法第28页
     ·结果判定第28-29页
   ·数据统计与分析第29-30页
3 结果与分析第30-43页
   ·王鸽α-Syn 基因克隆与测序结果第30-38页
     ·王鸽脑组织中总RNA 的提取与鉴定第30页
     ·王鸽α-Syn 基因的PCR 扩增结果第30-31页
     ·王鸽α-Syn PCR 产物胶回收结果第31页
     ·王鸽α-Syn 基因序列的测序结果第31-32页
     ·王鸽α-Syn 基因编码区分析结果第32-36页
     ·α-Syn 的3′RACE 反应结果第36-38页
   ·重组表达载体的构建与鉴定第38-40页
     ·目的片段与载体双酶切结果第38-39页
     ·融合蛋白的表达、鉴定与纯化结果第39-40页
   ·多克隆抗体的制备和鉴定结果第40-42页
     ·间接ELISA 法测定多克隆抗体效价的结果第40-41页
     ·Western blot 检测结果第41-42页
   ·免疫组化方法检测α-Syn 基因在王鸽脑内的分布规律第42页
     ·免疫组化方法优化选择第42页
     ·α-Syn 在王鸽脑不同部位的表达第42页
   ·王鸽AVM 急性中毒临床表现及α-Syn 在脑不同部位表达量的变化第42-43页
4 讨论第43-49页
   ·王鸽α-Syn 基因克隆第43-44页
     ·王鸽α-Syn 基因编码区及同源性分析第43页
     ·王鸽α-Syn 3′UTR 克隆第43-44页
   ·重组王鸽α-Syn 蛋白表达条件优化第44-45页
   ·王鸽α-Syn 多克隆抗体的制备第45页
   ·α-Syn 在王鸽脑不同部位的分布第45-46页
     ·免疫组化方法的建立和优化第45-46页
     ·α-Syn 在王鸽脑中的分布第46页
   ·AVM 急性中毒对 α-Syn 表达的影响第46-49页
     ·AVM 急性中毒的临床表现第46-47页
     ·AVM 急性中毒对 α-Syn 表达的影响第47-49页
5 结论第49-50页
致谢第50-51页
参考文献第51-57页
附录第57-61页
攻读硕士期间发表的学术论文第61页

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